伏马毒素的介绍
该毒素是1989年发现的一种新型毒素,由串珠镰刀菌等产生的真菌毒素。目前已知有7种衍生物,研究证实伏马毒素可导致马产生白脑软化症(ELEM),神经性中毒而呈现意识障碍、失明和运动失调,甚至造成死亡;对猪产生肺水肿综合症(PPE),并被怀疑可诱发人类的食道癌等疾病,从而对畜牧业及人类的健康构成威胁。对我国海门地区进行的3年的跟踪研究结果表明:伏马毒素还可使人导致肝癌。

据资料,伏马毒素大多存在于玉米及玉米制品中,其含量一般超过1mg/kg,研究证实,在大米、面条、调味品、高粱、啤酒中也有较低浓度的伏马毒素存在。伏马毒素检测方法主要有免疫亲和柱荧光法、免疫亲和柱-HPLC 法、毛细管电泳法、液相/质谱法。

免疫亲和柱荧光计测定过程

①标定值的设置

使用FumoniTest标定标准物。

②试验准备

(1)标定荧光计。

(2)配制甲醇/水(80:20 体积比)溶液(每周配制一次,或根据需要配制)。

(3)配制1倍 PBS 洗液缓冲液:取100mL 的10倍 PBS,加入到900mL 纯水中,即为1倍PBS缓冲液溶液。

(4)配制1倍 PBS/0.1%吐温-20洗液缓冲液:取100mL 的10倍浓缩液0.1%吐温 PBS 缓冲液,加入到 900mL 纯水中,即为1倍 PBS/0.1%吐温-20洗液缓冲液。

(5)配制 A+B 显色溶液(每5天配制一次):用微量移液器取20μL 的显色液B加入到显色液A瓶中。不用时,一定要将 A+B 显色溶液密封好,超过5天不能用。

(6)试剂空白试验(1mL甲醇+1mL A+B显色剂置于测试管中),荧光计读数应为0。

(7)缓冲液空白试验(2mL 1倍 PBS 缓冲液置于测试管中),荧光计读数应为0。

③样品提取

(1)称取 50g 磨细的样品,5g 氯化钠,置于搅拌杯中。

(2)加入100mL 甲醇/水(80+20)溶液。

(3)盖上搅拌杯的盖子,高速搅拌1min。

(4)取下盖子,将提取物倒入折叠式滤纸上,滤液收集于干净的容器中。

④提取物的稀释

(1)移取10.0mL 上步的滤液,置于干净的容器中。

(2)用40mL 1倍 PBS/0.1%吐温-20洗液缓冲液将滤液稀释,混匀。

(3)将上步稀释液通过玻璃微纤维滤纸(10m),滤液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL。

⑤分离柱色谱操作

(1)将上步10mL 滤液(4mL 相当于0.2g的样品),以1～2滴/秒的流速全部通过FumoniTest 亲和柱,直至空气进入到亲和柱中。

(2)将10mL 1倍 PBS/0.1%吐温-20洗液缓冲液以1～2滴/秒的流速通过亲和柱。

(3)将10mL1倍 PBS 缓冲液,以1～2滴/秒的流速通过亲和柱,直至空气进入到亲和柱中。

(4)用1.0mL HPLC 级的甲醇以1滴/秒的流速淋洗亲和柱,将所有样品淋洗液(1mL)收集于玻璃测试管中。

(5)将1.0mLA+B显色剂加到测试管的淋洗液中。混匀后,将测试管置于已标定好了的荧光计中。240s 后,读数。

⑥检测限

0.25mg/kg,测定范围:0～10mg/kg。