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蛋白质、多肽液相色谱纯化方法介绍(三)

2018.3.09

2、纯化前的准备工作

 

(1)样品稳定性试验

 

a、测定样品在pH2-9的稳定性;

b、测定样品在0-4mol/LNaCl及0-2mol/L硫酸铵中的稳定性;

c、测定样品在0-50%乙醇、甲醇中的稳定性;

d、测定样品在4-40℃的稳定性;

e、室温下静置过夜,测定对蛋白水解酶的稳定性。

(2)样品预处理

 

a、去除样品中颗粒物(0.45-0.22微米膜过滤或者10000g离心15分钟)

b、去除样品中脂类(10000g离心15分钟或有机溶剂抽提)

c、去除样品中核酸(加入核酸酶消化或者使核酸沉淀)

d、抑制样品中蛋白水解酶(加入蛋白酶抑制剂、低温下快速第一步分离或在蛋白酶缺陷宿主中表达重组蛋白)

 

(3)样品的保存条件:

 

短期储存(小于24小时)

a、避免接近或超过样品的稳定极限防止蛋白质变性或沉淀

b、在密闭容器中冰箱冷藏

较长期储存(数天)

a、b、同上

c、加入适当的抑菌剂

长期储存

a、同上

b、冰冻或者最好冻干(真空冷冻干燥)保存。


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