蛋白质、多肽液相色谱纯化方法介绍(三)
2、纯化前的准备工作
(1)样品稳定性试验
a、测定样品在pH2-9的稳定性;
b、测定样品在0-4mol/LNaCl及0-2mol/L硫酸铵中的稳定性;
c、测定样品在0-50%乙醇、甲醇中的稳定性;
d、测定样品在4-40℃的稳定性;
e、室温下静置过夜,测定对蛋白水解酶的稳定性。
(2)样品预处理
a、去除样品中颗粒物(0.45-0.22微米膜过滤或者10000g离心15分钟)
b、去除样品中脂类(10000g离心15分钟或有机溶剂抽提)
c、去除样品中核酸(加入核酸酶消化或者使核酸沉淀)
d、抑制样品中蛋白水解酶(加入蛋白酶抑制剂、低温下快速第一步分离或在蛋白酶缺陷宿主中表达重组蛋白)
(3)样品的保存条件:
短期储存(小于24小时)
a、避免接近或超过样品的稳定极限防止蛋白质变性或沉淀
b、在密闭容器中冰箱冷藏
较长期储存(数天)
a、b、同上
c、加入适当的抑菌剂
长期储存
a、同上
b、冰冻或者最好冻干(真空冷冻干燥)保存。
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