免疫印迹与免疫检测实验——转移槽转印蛋白质
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 制备抗原样品,并用小型或标准尺寸的单向或双向凝胶分离蛋白,在一个或多个泳道中分离预染色或生物素酰化的蛋白质分子量标准。 4. 在塑料转移盒的底边,依次将下面物品组装转印夹层垫或海绵,一张剪切得如凝胶大小的滤纸,并预先以转移缓冲液湿润凝胶,用一试管或玻璃棒在凝胶表面缓慢滚动,以排去凝胶和滤纸间的气泡。
5. 准备转印膜,按凝胶大小但各边都比凝胶大约1 mm 剪膜。成45。地慢慢将凝胶放入蒸馏水中,水将会渗进膜中并润湿整个表面。然后在转移缓冲液中平衡10~15 min,PVDF膜短暂地在100%甲醇中放一下,然后在转移缓冲液中平衡10~15 min。
7. 润湿另一张Whatman 3MM 滤纸,并置于膜的阳极面,排去所有气泡,在滤纸的顶部放另一块Scotch-Brite垫或海绵。
9. 往转移槽中加入转移缓冲液,按正确的极性方向将转移盒放进电转仪中,连接电源。
12. 凝胶用考马斯亮蓝染色以确定转移效率。需要时,也可将硝酸纤维素膜或PVDF膜以辅助方案提供的可逆染色方法使蛋白质显迹,也可用如考马斯亮蓝、印度墨墨汁、萘酚蓝或胶体金不可逆染色。 |
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