异柠檬酸脱氢酶测定实验
基本方案
实验方法原理 |
异柠檬酸脱氢酶(NADP+),异柠檬酸:NADP+ 氧化还原酶(脱羧)。 D-异柠檬酸 + NADP+ → CO2 + 2-酮戊二酸 + NADPH + H+ 这里所描述的实验步骤用 NADP,可以用 NAD 来代替,也可以用异柠檬酸脱氢酶(NAD +),异柠檬酸:NAD + 氧化还原酶(脱羧)来代替。 |
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实验材料 | 异柠檬酸脱氢酶溶液 |
试剂、试剂盒 | 咪唑-HCl NADP MgCl2 异柠檬酸溶液 |
仪器、耗材 | 分光光度计 |
实验步骤 |
实验所需「试剂」具体见「其他」 0.98 ml 实验混合物 0.02 ml 酶溶液 25℃ 时,于 340 nm 处吸收值降低。NADPH 的吸收系数 ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
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注意事项 | |
其他 |
试剂: 0.1 mol/l 咪唑-HCl,pH 8.0 0.01 mol/l NADP(Mr=787.4;79 mg 溶于10 ml 水中) 0.1 mol/l MgCl2(MgCl2·6H2O,Mr=203.3;203 mg 溶于10 ml 水中) 0.025 mol/l 异柠檬酸溶液(异柠檬酸,三钠盐,Mr=258.1;65 mg 溶于 10 ml 水中) 异柠檬酸脱氢酶(原料溶液,10 mg/l,使用前稀释 100 倍)
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