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液相色谱系统的日常维护及注意事项(之二)

2018.2.28

  流动相使用的注意事项必须使用HPLC级或相当于该级别的流动相,并要先经0.45μm薄膜过滤。过滤后的流动相必须经过充分脱气,以除去其中溶解的气体(如02),如不脱气易产生气泡,增加基线噪声,造成灵敏度下降,甚至无法分析。

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  几种脱气方法比较:

  1、 氦气脱气法:利用液体中氦气的溶解度比空气低,连续吹氦脱气,效果较好但成本高。

  2、 加热回流法:效果较好,但操作复杂,且有毒性挥发污染。

  3、 抽真空脱气法:易抽走有机相

  4、 超声脱气法:一种较为常见的脱气法。流动相放在超声波容器中,用超声波震荡10~15 分钟,此法效果并不太好但操作简单。如果管路中使用peek树脂部件,请不要使用下列流动相:浓硫酸、浓硝酸、二氯乙酸、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿和二甲基亚砜

  特别注意HPLC使用过后的系统清洗:含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法:

  1、 先用100%的纯水冲洗,打开排放阀,用3~5ml/min的流量,洗二十分钟左右后停泵。此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗

  2、 再用95:5的甲醇/水清洗整个系统,关闭排放阀,用1ml/min的流量,洗30~60分钟后停泵。此举主要是用水清洗整个系统中的盐,用5%的甲醇主要是为了保护色谱柱。

  3、 最后用100%的甲醇清洗整个系统,用1ml/min的流量,洗2分钟左右,然后关机。如果流动相中不含盐,则使用上述第三步清洗即可。

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