慢病毒的浓缩与纯化——PEG-8000浓缩法
实验概要
本实验介绍了用PEG-8000浓缩法浓缩与纯化慢病毒的操作步骤。
主要试剂
1. NaCl
2. PEG8000
主要设备
1. 高压灭菌锅
2. 0.45μm滤头
3. 高速离心机
4. 低温冰箱
实验步骤
1. 5X PEG8000 NaCl配制称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中；121摄氏度 30min 湿热灭绝 30min；保存在4℃。
2. 使用0.45μm滤头过滤慢病毒上清液；
3. 每30ml过滤后的病毒初始液，加入5X PEG-8000 NaCl母液7.5 ml；
4. 每20～30min混合一次，共进行3-5次；
5. 4度放置过夜；
6. 4度，4000 g，离心 20min；
7. 吸弃上清，静置管子1～2分钟，吸走残余液体；
8. 加入适量的慢病毒溶解液溶解慢病毒沉淀；
9. 集中后的病毒悬液分装成50 μl每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃。
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