关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×

用基因工程生产干扰素的具体过程

2022.9.19

1. 设计合成干扰素基因的两端引物(完全的),每条引物内或5'-端最好有内切酶酶切位点。
2. 有药物诱导细胞,如佛波酯,使细胞表达干扰素升高。
3. 破碎细胞,提取细胞总mRNA.
4. 用逆转录试剂盒逆转录,把总mRNA逆转录成cDNA
5. 以cDNA为模板、干扰素引物为引物,PCR,得到完全的干扰素基因的PCR产物
6. 提取载体(质粒、病毒等),双酶切,再把干扰素基因的PCR产物用相应的酶酶切,用连接酶连接
7.连接完成后分离纯化,测序,与原干扰素序列比对。
8.鉴定序列无误后(无义突变也行),导入受体细胞,筛选
9.筛选出来后,提取重组产生的干扰素,活性测定
10.有活性再扩大规模培养,提取生产

推荐
关闭