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毛细管电泳在微卫星标记中的应用

STR/SSR(Microsatellite,微卫星标记)也称为短串联重复序列(STR)或简单重复序列(SSR),是广泛分布在真核生物基因组中的简单重复序列,因此被认为是继限制性片段长度多态性(RFLP)之后的第二代遗传标记,广泛应用于遗传制图、基因定位、法医学鉴定、人类学以及遗传病的诊断等许多领域的研究。

SSR 标记的检测可采用琼脂糖凝胶电泳、非变性 PAGE、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(变性 PAGE)或毛细管电泳荧光检测法, 所揭示的多态性因采用方法的不同而有所差别。 由于 SSR 主要表现为 2~5 个核苷酸重复次数的变化, 多态性片段长度的差异可以小到 2~4 bp, 这就需要更灵敏有效的检测方法。琼脂糖凝胶电泳分辨率有限,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)或称为活性电泳是在不加入 SDS 和疏基乙醇等变性剂的条件下,对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,常用于酶的鉴定、同工酶分析和提纯。

目前, 最常规的 SSR 检测方法主要是利用变性 PAGE 结合放射性标记或银染技术,但是操作复杂费时费力效率低,试剂含污染物质。毛细管电泳荧光检测法是一种快速、准确、高效率的 SSR 标记检测方法, 但仪器及试剂的高成本限制了其应用的广泛性。

近几年由台湾光鼎公司开发的 Qsep100 毛细管电泳仪,由于其操作简便、成本低廉、速度快等特点受到广大科研工作者的喜爱。

Qsep100 毛细管电泳仪也称全自动核酸蛋白分析系统,无需制胶、染色、加样、拍照等步骤,也不需荧光标记,只需将 PCR 产物放于仪器样品盘,全自动上样电泳出结果,操作简便,分辨率高,结果以数字峰形图和模拟凝胶图呈现,无污染无伤害。既不需要漫长的等待、接触剧毒的制胶染色过程,也不需花费高昂的成本,即可获得清晰可靠的结果。最佳分辨率可达 1-4bp,1-96 个样本灵活上样,数据分析简便灵活,可挑选任意结果进行统一分析。下图展示了操作程序及常见图谱。

Qsep100 全自动核酸蛋白分析系统也广泛用于 AFLP(amplified fragment length polymorphism,扩增片段长度多态性)/RFLP、高分辨率多重 PCR 分析、常规 PCR 产物检测等研究。

图示 Qsep100 简便操作:

 

常见样本图谱:

                                

                               

图 1:单个样本峰形图


    

图 2:系列样本模拟凝胶图


    

图 3:系列样本峰形图


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