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面粉中呕吐毒素检测实验全解析
呕吐毒素主体成分为DON（deoxynivalenol, 脱氧雪腐镰刀菌烯醇），属于单端孢霉烯族化合物，主要由禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌、拟枝孢镰刀菌、粉红镰刀菌、雪腐镰刀菌等镰刀菌产生。因为该种物质可以引起猪产生呕吐症状，故命名为呕吐毒素。常见于大麦，小麦，玉米等谷物饲料中；呕吐毒素对人和动物均有很强的毒性，能引起人和动物呕吐、腹泻、皮肤刺激、拒食、神经紊乱、流产、死胎等，猪是对呕吐毒素最敏感的动物。
上海安谱公司使用美国beacon 呕吐毒素免疫亲和柱以及美国 O2SI 的标准品参照GBT 23503-2009 的方法检测面粉中的呕吐毒素，并对其中注意点进行全面解析，给客户提供一个完整的解决方案。
一：样品前处理
称取10g 面粉加入100ml 水，高速均质1 分钟，用玻璃纤维滤纸过滤至澄清，取2ml 滤液作为待上样液。
二：检测前的准备和注意事项
1. 将所需的免疫亲和柱在使用前回温至室温（20-25℃）。
2. 免疫亲和柱的上下端有塑料塞子，在使用时可以取下。
3. 在使用的过程中避免免疫亲和柱的干燥。例外情况为洗脱前短暂的排空和洗脱后的完全排空
4. 过高的压力或真空提取设备产生的负压会压紧凝胶而导致回收率降低。
三：小柱操作过程
• 将5ml 或10ml 注射器连接于免疫亲和柱上端（通过小柱连接件）。
• 2ml 处理好的样品液以1-2 滴/ 秒的速度通过亲合柱，弃掉流出的液体。
• 以5ml 水淋洗柱子一次，弃掉流出的液体。
• 利用真空设备压入空气（约10 秒），确保排除所有的液体。
• 用1ml 甲醇缓慢洗脱（流速约为2-3 秒每滴），残留的洗脱液使用空气压出或真空抽出（30 秒）并将洗脱液收集于干净的收集管中。
• 将洗脱液吹干后加入1ml 流动相复溶，用于液相色谱检测。
四：液相方法
色谱柱：C18-wp 150*4.6mm，5um
流动相: 甲醇：水=20:80
流速：1mL/min
柱温：35℃
进样量：50uL
检测波长：218nm
五：实验谱图
图一：面粉500ppb 加标
图二：面粉基质空白
图三：500ppb 标准谱图
六：实验数据
面粉 样品1 样品2
500ppb 加标回收率 94.2% 80%
七：实验注意事项
认错峰，误认为回收率为0
95% 乙酸乙酯做溶剂的呕吐毒素标准品谱图
VS
纯甲醇做溶剂的呕吐毒素标准品谱图
真相
客户把标准品里面的溶剂乙酸乙酯误认成呕吐毒素的峰。从对比图可看出：95% 乙酸乙酯做溶剂的标准品会带来认错峰的干扰。
一方面因为该实验色谱条件中检测波长：218nm；而乙酸乙酯的紫外截止波长为256nm，这意味着，乙酸乙酯在218nm 的波长下，照样会有吸收，就算200ug/mL（200ppm）的浓度稀释到1ppm，其中乙酸乙酯的浓度会达到4750ppm；这样子标准品进样的时候乙酸乙酯会在液相色谱有一个很大的吸收，相对而言1ppm 的呕吐毒素显得很小，客户很容易误认，后来客户用乙酸乙酯进样验证确实是乙酸乙酯的峰。
另外一方面呕吐毒素的化学结构，共轭体系不强，只有一个碳碳双键和羰基共轭，这样子在218nm 下吸收不强，导致其相对乙酸乙酯的峰来说，峰型很小，容易被客户忽略，当小柱经过上样，淋洗步骤后，乙酸乙酯完全被洗掉，洗脱液里面只有甲醇，谱图上不会出现乙酸乙酯的峰，所以才会出现客户做出来回收率为零的假结果。
为了彻底解决这个问题，安谱新推出了用甲醇做为溶剂的标准品，从源头上彻底解决这个问题。
CDGG-014445-06
脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素）标准品
200ug/mL 于甲醇 1mL
八：试验中用到的耗材
