分享至
极速揭秘 | 10分钟内完成UV-Vis热解链实验
寡核苷酸的热解链实验是一项重要的确认测试，用于分析双链结构的热稳定性，也是 PCR 反应退火温度的重要参考依据。
该实验可以通过紫外可见分光光度计实现。通常的测试方法为测定核酸类药物在 260nm 处的吸光度值随温度变化的曲线。随着温度的升高，双链结构逐渐打开，260nm 处的吸光度值逐渐升高，直至完全打开成单链后吸光度值保持稳定，当双链结构失去一半时所对应的温度定义为解链温度（Tm 值）。
在此实验中，最重要的是要控制温度的变化，传统的紫外分光光度计需要使用复杂的附件来控制温度，例如，水控温系统需要插额外的管线并进行换水和清洁的工作。同时，测试耗时长，至少需要 1 个小时以上才能完成。
借助 Cary3500 UV-Vis 紫外可见分光光度计可在 10 分钟内完成解链温度的分析。
Cary3500 UV-Vis 紫外可见分光光度计采用帕尔贴风冷控温系统，升温降温全程电子控温，无需额外管线。搭配温度探头触达溶液，精准实现溶液内的温度控制，同时，搅拌子可使每个样品的温度保持均匀，这样就可以设置更快的升温速率，缩短分析时间，且不会降低数据质量。
Cary3500 UV-Vis 最快可设置 40℃/min 的升温速率，经过验证，不同的升温速率下得到的 Tm 值的波动小于 0.4℃。
图 1. 鲱鱼精子 DNA 吸光度与温度 (A) 和相应的一阶导数 (B) 作为升温速率的函数
另外，Cary3500UV-Vis 多池控温的选项，可以以快速升温实现 4 个样品的同时测试和慢速升温实现 7 个样品的同时测试。
下面，我们通过视频来查看下 Cary3500 是如何实现热解链温度的测试的。
当然，Cary3500UV-Vis 的操作软件也可以与 Agilent OpenLab 软件集成。OpenLab 提供技术控制来安全地获取、处理报告和存储数据。对于必须遵循 FDA 21 CFR Part 11，欧盟附录 11，GAMP5 以及 ISO/IEC 17025 和 EPA 40 CFR Part 160 合规指南的实验室来说，这些控制是必不可少的。
