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默克生命科学Amicon®Pro蛋白纯化浓缩操作指南
摘要: 蛋白质纯化是指将一种或几种蛋白质从复杂的混合物中分离的一系列过程。默克生命科学为您提供Amicon®Pro蛋白纯化浓缩操作指南。
蛋白纯化一步就搞定的黑科技，你为什么还没用？
耗时长，产量低
大家其实都一样
蛋白从克隆表达到纯化脱盐浓缩，一路经过千山万水，宝贵的活性蛋白产量是很多人的“命根子”。然鹅，努力的我们还是苦恼的时候多，欣喜的时候太少太少～～
纯化黑科技，是时候放大招了
有没有什么好方法能让操作步骤少一点、再少一点，而同时蛋白的活性及产量损失也少一点、再少一点？？
让我们看看那些蛋白操作高手的秘密武器吧
——Amicon®Pro
由传统方法升级到革命性的Amicon®Pro纯化超滤系统，纯化、浓缩、换液从此不同。
真的能这样操作？？
视频：https://v.qq.com/x/page/q0378jlg84p.html
让我们一起来欣赏一下Amicon®Pro带来的蛋白纯化浓缩的流畅操作。
操作1
亲和纯化——多样本操作，更快更好
6次低速离心，总耗时~100分钟
（含65分钟孵育时间）
1.在Amicon®Pro上样池中加入200µL亲和纯化树脂（根据融合标签选择，50%悬浊液）
和1.5mL漂洗缓冲液。1,000×g离心1min。
2.加入0.5mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1h，其间可温和搅动促进结合。
3.
1,000×g离心1min 以去除未结合杂质。
4.加入1.5mL漂洗缓冲液，1,000×g离心1min。
5.上样池下端接上Amicon®Ultra 0.5mL超滤管（有5种截留分子量规格可选）。
6.加入1mL洗脱缓冲液与树脂混匀。孵育5min。
7.4,000×g离心15min。
8.加上蛋白样品最终需要的缓冲液1.5mL。4,000×g离心15min，置换缓冲液的同时进行浓缩。
9.倒转Amicon®Ultra 0.5mL超滤管，1,000×g离心回收纯化和浓缩好的蛋白。
操作2
脱盐/缓冲液置换并浓缩——
20倍体积温和换液，效率大大提升
5次低速离心，总耗时~35分钟
1.在上样池中加入0.5mL TBS-T预湿Amicon®Pro。1,000×g离心1min。
2.优化选做：加入1.5mL用于置换的缓冲液，1,000×g离心1min。
3.上样池下端接上Amicon®Ultra 0.5mL超滤管（有5种截留分子量规格可选）。
4.加入1.5mL样品，4,000×g离心15min进行浓缩。
5.加入1.5mL需要置换的缓冲液，4,000×g离心15min，换液的同时进行浓缩。
6.倒转Amicon®Ultra 0.5mL超滤管，1,000×g离心回收处理好的蛋白。
操作3
抗体标记——
操作步骤少、时间节省而抗体得率高
5次低速离心，总耗时~50分钟
1.在上样池中加入0.5mL TBS-T预湿Amicon®Pro。1,000×g离心1min。
2.加入抗体样品
• 对于比较稀释的样品（< 1mg/mL）
-上样池下端接上Amicon®Ultra 0.5mL超滤管（建议使用50kDa）。
-加上至多1mL抗体样品， 4,000×g离心15min。
• 对于浓度较高的的样品（ 1mg/mL）
-在Amicon®Ultra 0.5mL超滤管（建议使用50kDa）中加入至多100µL样品。
-将装有样品的Amicon®Ultra 0.5mL超滤管接在Amicon®Pro上样池的下端。
3.Amicon®Pro上样池内加入预先准备好的1.5mL含有染料的反应混合液。
4.4,000×g离心15min。
5.优化选做：将样品在室温下多孵育30 min。
6.上样池中加入1.5mL PBS± NaN3。
7.4,000×g离心15min换液同时浓缩。
8.倒转Amicon®Ultra 0.5mL超滤管1,000×g离心回收标记好的抗体。
更多关于Amicon®Pro的灵活应用正在各个实验室里被大家创造出来～～
欢迎告诉我们Amicon® Pro是如何帮助您提高蛋白操作效率的……
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（不含超滤管）
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