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Cytek客户之声——我眼中的光谱流式(美国芝加哥大学)

Cytek Biosciences

2020.4.25

Laura K. Johnston，美国芝加哥大学流式和抗体技术部副主任

什么是光谱流式？

在传统的流式细胞分析中，每个检测器只对应检测一个荧光染料，并且只选择性的接收其发射光谱的一小部分 (通常是发射光谱的峰值部分)。在这种情况下，荧光染料的发射光谱只有一小部分被记录下来。
在光谱流式细胞分析中，我们将不再受限于一个检测器只对应一个荧光染料的情况，相反，在光谱流式细胞仪中的所有检测器都会捕捉来自荧光染料的信号，从而获得该荧光染料完整的发射光谱特征。（图1）

检测获得的原始数据，通过数学模型解析后，便可确定是什么荧光染料。这样一来，只要存在独特的光谱特征，即使相似性很高的荧光染料，也可以被鉴别。例如，Alexa Fluor 647和APC，这两个在传统流式上不能共用的荧光素，却可以用光谱流式很好的区分开。（图2）

图1 –传统流式（上）与光谱流式（下）收集发射光信号的区别

我用Cytek Aurora能做些什么？

我们有一台5激光配置的Aurora，包括，紫外，紫，蓝，黄绿，红激光。

在Aurora上可以运行的颜色数量，取决于商业可用的荧光素数量及光谱的解析算法。理论上讲，用检测器数量减去2，就是可以解析的颜色数量，那么对于我们64检测通道的Aurora而言，可以解析的荧光素数量就是62个。目前，Cytek已成功实现30色方案的检测，所以我们现在做30色的流式方案是完全没有问题的。如果您想要做更大的panel，我们可以一起探讨，看看可以加入哪些额外的荧光染料。（编者注：Cytek最近已成功实现5激光40色的检测方案，可参考文章 将40个颜色放到一管里检测？）

至于荧光染料，Aurora可以检测绝大多数荧光素，包括，Brilliant violets, Alexa fluors, Super brights, Qdots, 死活染料等。

Aurora上还有一个体积计数器可用于细胞计数，以及一个96孔上样板。

图2 Cytek Aurora 能很好区分高度重叠的染料

在Cytek Aurora上做实验是种什么体验？

▌ 关于样本处理：样本的准备与染色过程与传统流式相似。

▌ 关于方案：任何在传统流式上开发的方案都可以在光谱流式上使用。我们强烈建议您注重方案设计，因为越大的panel，方案设计就更加重要。

▌ 关于软件：Aurora的软件与FACS DIVA相似，可以很容易就掌握。事实上，Aurora的设置会更加容易，如调节电压等传统流式所需要的操作，Aurora也是不需要的。

▌关于数据分析：由于光谱的解析是通过数学计算的，不能手动进行，所以Aurora单染管（也叫参比对照）的准确性很重要。更多信息可以参考我们的培训材料。现在，光谱解析是在Cytek SpectroFlo 软件和FlowJo 软件上进行的，一旦解析完成，你可以用任何可以分析.FCS文件的程序（如FlowJo, FCSExpress等）来处理数据。单就解析而言，SpectroFlo相较于FlowJo更加容易使用，所以我们推荐在使用SpectroFlo 进行分析。