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紫外可见分光光度计的工作原理
分子的紫外-可见吸收光谱是分子中某些基团吸收紫外可见光后电子能级跃迁产生的吸收光谱。由于各种物质具有不同的分子、原子和不同的分子结构，它们的光吸收和能量吸收不一样，因此，每种物质都有自己独特的固定的吸收谱曲线，可以根据吸收光谱中某些特征波的吸光度来判断或确定物质的含量，这是分光度法定性和定量分析的基础。
分光度法是根据物质的吸收光谱研究物质组成、结构和相互作用的一种有效手段。它是一种能反映分子中某些基团信息的带状光谱。用标准光学地图集结合其他方法进行定性分析。
根据Lambert-Beer定律，光的吸收与吸收层的厚度成正比，而Beer定律表明光的吸收与溶液的浓度成正比，同时考虑吸收层厚度和溶液浓度对吸收速率的影响，得到了A=εBC，(A为吸光度，ε为摩尔吸光系数，b为液池厚度，c为溶液浓度)的朗伯特-比尔定律，可以对溶液进行定量分析。
分析样品和标准样品是在相同浓度的溶剂中制备的，紫外-可见吸收光谱在相同的条件下测定。如果两者是同一物质，则两者的光谱应该完全相同。如果没有标准样品，也可以与现成的标准光谱进行比较。这种方法要求仪器准确，精密度高，测定条件相同。
实验结果表明，不同极性溶剂产生的氢键强度也不同，可以用来判断化合物在不同溶剂中的氢键强度，从而确定选择哪种溶剂。
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