昔日漏网之鱼,今日捉拿在案--Capto Core 400专门纯化小病毒!
Capto Core 家族是非常特殊的一类填料,和均匀的琼脂糖填料不同的是,这类填料有一个惰性的外壳,大约5um的厚度,将复合强吸附配基手臂辛胺基隔离在内部,只能结合进入到孔里面的物质,通常可以有效的去除HCP,DNA(切碎),内毒素,酶类,等一切可以进入到孔里的东西,而且不受缓冲液中的盐和pH的影响。
根据孔的大小分成两个不同的型号,这就是我们今天要介绍的Capto Core 400和已经在病毒领域广泛应用的Capto Core 700。
图1 Capto Core 700/400结构
性质参数
表1 Capto Core 400和Capto Core 700的性质参数对比
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相同点
a) 最高可以达到分子筛的上样量的100倍,同时流速明显高于分子筛,最低可以达到1min的保留时间,从而大大减少工艺时间,提高生产效率
b) 目的物分子在上样过程中在外水体积中流穿出来,而杂质通过孔内的配基结合进行去除
c) 通过流穿模式直接优化可以获得稳定的纯化效果,允许操作窗口很宽,和分子筛对比可以明显看出其优势差别,如下图2
图2 Capto Core 700和分子筛在上样量和流速的对比
03
应用领域
a) Capto Core 400:如有病毒在Capto Core 700 上收率不佳,有明显病毒吸附现象,可尝试Capto Core 400进行优化
b) Capto Core 700应用领域——分子量大于700KD(约30nm)的病毒/大分子
图3 常见病毒颗粒大小
图4 Capto Core 700和Capto Core 400适合的应用领域
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应用举例
表2和图5、6列出了三种不同大小和来源的病毒在Capto Core 700和Capto Core 400上的对比。实验采用流穿模式,通过收集流穿液中目的蛋白的回收率和杂质残留量判断是否适合使用这两种层析介质进行纯化。
表2. 不同病毒样品进行层析操作的性质特点
图5 ELISA检测三种病毒的收率
图6 ELISA检测小RNA病毒不同流速下在Capto Core 700和Capto Core 400上的纯化收率
图5结果表明:在Capto Core 700层析中,逆转录病毒和黄病毒会有少量的吸附,小RNA几乎完全吸附,而三者在Capto Core 400上的收率都很好。
图6结果表明:流速是Capto Core介质纯化需要优化的参数,优化的目标是找到一个收率和纯度的平衡。
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订购信息
同样 Capto Core 400提供实验室规格预装柱以及用于工业化生产的大包装填料,欢迎咨询GE当地销售或产品技术支持。
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