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Ä爱纯派 | ÄKTA新玩法之自动化两步层析
是最长情的告白
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Ä爱纯派
GE小编
刚开学又可以放假过中秋，童鞋们是不是high起来了。虽然昨天预祝过一次，但是祝福不嫌多，GE小编祝各位中秋快乐，合家欢聚哦~
在这个很high的日子，小编也打算给大家推送一篇很high的，层析实验新玩法技巧！今天就让小编带大家来学习下，ÄKTA pure和ÄKTA avant的新玩法——两步层析吧。
GE小编所谓自动化两步层析，是指初始样品上样后，经过全自动运行，直接得到经过两种层析柱纯化的样品。通常第一步为亲和层析或经过优化的离子交换层析，第二步为脱盐或凝胶过滤层析。
自动化两步层析优势
省时省力无需手动操作即可完成两根层析柱的连续层析过程安全减少样品转移时间避免人为失误连续自动化运行可减少人为失误GE小编
两步层析尤其适合样品种类较多、需要不止一步纯化且纯化流程类似的层析试验。 ÄKTA pure或ÄKTA avant可通过两种方法实现自动化两步层析：两步直接串联或通过样品环暂存样品。 两步直接串联 第一根层析柱洗脱的目的峰直接上样至第二根层析柱，典型应用：抗体纯化后直接进行pH中和。
运行流路如下：
系统准备：system wash
Column 2平衡：system pump-V9-V-Coulumn 2-UV-Out
Column 1平衡、上样和清洗：system pump-column 1-UV-Out
Column 1洗脱及Column 2上样：system pump-column 1-UV-V9-V-Column 2-V9-V-Out
Column 2洗脱：system pump-V9-V-Coulumn 2-UV-Out
通过样品环暂存样品 即在第一根层析柱和第二根层析柱之间配置样品环，将第一步洗脱的样品先暂存在样品环中，之后通过流路切换将样品环中的样品上样至第二根层析柱。典型应用：his标签蛋白纯化并去除咪唑。
运行流路如下：
系统准备：system wash
Column 1 平衡： system pump-column 1-UV-Waste
Column 1 上样： system pump- V9-M-column 1-UV-Waste
Column 1 洗脱（出峰之前）：system pump-column 1-UV-Waste
Column 1 洗脱（出峰过程）：system pump-column 1-UV-Out -V9-M-V9-inj-V9-L-Column 2-Waste
Column 1 洗脱（出峰结束）：system pump-column 1-UV-Waste
Column 2 平衡：system pump-column 2-UV-Waste
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