徕卡显微系统(上海)贸易有限公司
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手把手教你用THUNDER——时间序列拍摄篇
上周我们讲过了多通道拍摄，如果需要进行活体动态追踪观察，就要用到时间序列拍摄。
首先，在软件左上方“Acquisition Mode”中选择拍摄模式xyt或xyzt。
这边我们选择xyt。
在弹出的时间序列下拉框中，在“Time Interval”中可以设置拍摄的时间间隔，如果需要无间隔拍摄可勾选“Minimize”，勾选“Duration”可设置总的拍摄时间，或者通过设定“Cycle”数。例如我们这里拍5个cycle。
在对活细胞的长时间拍摄过程中经常会遇到焦面漂移，对此leica也有相应的解决方案，我们可点击上方这个向下箭头按钮，下面即可弹出AFC的选框，这里可以看到有3种方式，第一种high speed AF是系统自动聚焦，帮我们选取最清晰的焦面。第二种是AFC自适应焦面追踪系统。第三种是前两者的结合。
我们最常用的是第二种AFC。当前可以看到AFC已经开启，指示灯为绿色。
下面有两种工作方式，第一种是持续性追焦，是指无论图像预览和成像时，系统都会持续性地进行焦面追踪和锁定。第二种是指只在需要的时候系统进行焦面追踪。
例如，这里我们可选择第二种方式，然后进行图像预览。
在绿色通道下，调整至最佳焦面之后，勾选set AFC position锁定焦面。
然后在time lapse中可以去定义每个cycle或每隔几个cycle如2个，去追踪焦面。完成之后，同样的，参考前面的操作设置好多通道、曝光时间和选用合适的THUNDER方法。
所有参数设置完成后，点击“start”按钮开始拍摄。
结束后，可得到THUNDER的时间序列图像。可通过播放来观看视频。
同样的，文件可在左上角open projects里面查看，文件后缀为xyt。
如果需要拍摄三维立体图像则需要进行Z stack拍摄，这一部分，下期为您详细介绍。
往期回顾
手把手教你用THUNDER —— 多通道拍摄篇
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