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药物分析 | 欧洲药典中扑热息痛（对乙酰氨基酚）分析方法
前言
N- (4-羟苯基)乙酰胺，通常称为扑热息痛，是当今药物市场上我们最为熟悉的止痛药和退热药之一。由于其广泛的适用性，因此对快速和高效地分析扑热息痛及其相关杂质的研究引起了人们极大的兴趣。本文介绍了欧洲药典方法草案（PA/PH/Exp. 10A/T (19) 136 ANP – 32.1）中提到的扑热息痛及复杂相关物质的分析。该草案目前正在审核中，有望取代现有的药典方法。
通过利用色谱柱的选择性，我们能够提高扑热息痛和主要降解产物4-氨基苯酚（杂质K）的分离度，4-氨基苯酚是通过扑热息痛水解而形成的杂质。欧洲药典要求杂质K和扑热息痛之间的分离度至少为5.0，以满足系统适用性；本文展示的分离度明显高于药典要求。此外，所有14种相关杂质的分离也可以达到。利用拥有核-壳结构及C18键合相的二氧化硅颗粒HPLC色谱柱进行分析，可最大限度地提高分析方法的表现。
值得注意的是，在使用该方法的原研柱进行分析时，我们发现杂质I，J和L的洗脱顺序与方法提供的色谱图有所不同；进一步使用Kinetex 5um C18进行验证时也观察到了同样的现象。同时，杂质G和M的洗脱顺序在Kinetex 5um C18上与原研柱有所不同。所有杂质的保留时间以及洗脱顺序都进行过单标验证。
色谱分析条件
色谱柱 | Kinetex® 5 μm C18 150 x 4.6 mm column |
货号 | 00F-4601-E0 |
流动相 | A: 磷酸钾溶液（1.7g磷酸二氢钾及1.8g磷酸氢二钾溶于1000g水中） B: 甲醇 |
流速 | 1.5ml/min |
温度 | 30 ℃ |
检测器 | UV@254nm |
自动进样器温度 | 5 ℃ |
梯度 | Time (min) Mobile Phase A (% v/v) Mobile Phase B (% v/v) |
0 | 95 | 5 |
2.3 | 95 | 5 |
15.2 | 90 | 10 |
29.6 | 90 | 10 |
58.4 | 66 | 34 |
60.8 | 66 | 34 |
图1：扑热息痛及14中杂质在Kinetex® 5 μm C18色谱柱上的分离，所用系统Agilent® 1290
图2：4个不同批次Kinetex®5μm C18色谱柱上获得的色谱图
表1：杂质K和扑热息痛使用不同批次色谱柱的保留时间以及分离度结果
批次 | Rt杂质k | Rt 扑热息痛 | 分离度（USP） |
0070 | 2.05 | 6.33 | 33.23 |
0075 | 2.01 | 6.24 | 32.20 |
0077 | 1.99 | 6.20 | 32.27 |
0079 | 1.99 | 6.24 | 33.55 |
结论
Kinetex 5μm C18在根据欧洲药典进行扑热息痛及相关杂质分析中是适用的，并且相比原研柱可以提高系统适用性溶液的分离度。通过4个不同批次的Kinetex 5μm C18色谱柱的使用，展示了该色谱柱批次间的重现性（保留时间和分离度）。因此，Kinetex 5μm C18是实验室遵循欧洲药典进行扑热息痛分析的可靠解决方案。
