毒理学新星：干血斑 (DBS) 结合液相串联质谱 (LC-MS / MS) 的技术

力扬实验室自动化方案

2018.1.23

自上世纪 60 年代以来，干血斑 (DBS) 就已被引入遗传病学研究之中，担任着遗传代谢紊乱筛查的重要角色。随着科学的发展和对 DBS 的深入了解，干血斑 (DBS) 逐渐被各行各业所接受。科学家们通过引入 LC-MS / MS，来分析 DBS 小血药量。不仅如此，其还可以用于毒理学﹑药物治疗监测﹑药物诊断和筛查非法药物等各个领域，应用广泛。

在毒理学领域里，DBS 扮演着极为重要的角色。许多药物，如苯二氮卓类，及对乙酰氨基酚等小分子药物都已经用 DBS 进行了测试，与早期的血液提取方法 (SPE 和 LLE) 不同的是，DBS 具有更简洁的分析程序，更低的血液量 (少于 50μL)，而最为突出的是它还有更短的分析时间，成本更低。

苯二氮平，学名苯二氮䓬类药物 (Benzodiazepines，BZDs)，是一种精神类药物，其核心化学结构是一个苯环和一个䓬环。在临床环境中，苯二氮䓬常被作为镇静催眠药来使用，也用作抗癫痫药和抗焦虑药。

1977 年，苯二氮䓬类药物已是全球最高处方量的药物。此类药物的工作原理并不复杂，它用于体内抑制性神经递质：γ-氨基丁酸 (GABA) 的一种受体“GABAA受体复合物”，所以这类药物的效应是和脑内 GABA 水平密切相关的，如果脑内 GABA 水平较高，则此类药物的效应会更加明显。

在实验中，进行了相对的优化，包括对 18 种苯二氮卓类药物，7 种苯二氮卓类药物代谢物和 1 种血液中唑类药物 (zolpidem) 分析的 DBS 程序和 LC-MS / MS 条件。首先，我们将 30μL 全血点在 DBS 卡上并在干燥器中干燥 2 小时，再将 6-mm 圆盘打孔，然后在具有 300μL 甲醇 / 乙腈 (1：1， v/v) 的离心管中混合并涡旋 1min。待其蒸发后，重新溶解在 100μL LC-MS / MS 流动相中并注入 5μL 进行分析。

在对结果进行分析的过程中，我们可以得到，所有方法验证参数 - LLOD，LLOQ，准确度 (批内和批间) 和精密度（批内和批间）均满足方法验证标准 15％，这就说明了实验中的回收率和过程效率的结果都很好。最关键的是，分析只需几分钟，而该方法也成功验证了使用 DBS-MS 分析 26 种苯二氮卓类药物﹑苯二氮卓代谢物和 z-药物 (唑吡坦) 是一种快速可靠的样品制备方法。

当然，随着时代的进步，干血斑 (DBS) 还将在更多的行业扮演着不同的角色，其将不断推动时代的进步，让以前所不能想象的变为可能，这便是科学的魅力所在了。

参考文献：

Lee H, et al. Analysis of benzodiazepines and their metabolites using DBS cards and LC-MS/MS. Forensic Sci Int. (2015) Oct; 255:137-45. DOI: 10.1016/j.forsciint.2015.07.004

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毒理学新星：干血斑 (DBS) 结合液相串联质谱 (LC-MS / MS) 的技术

周锦帆