假阴性结果案例分析
背景
有一例异常标本,血AMY的原始结果为0 U/L,经20倍稀释复查后结果为9378 U/L。(如下图1)
图1
PART01
提出问题
问题一:图1的AMY反应曲线中可看出明显发生底物耗尽现象,仪器为何没有相应反应界限数据报警?
问题二:图1的反应过程吸光度大部分超出3.3ABS,仪器为何没有发生吸光度超限数据报警?
PART02
分析问题
底物耗尽的报警原理
图2 - 反应界限吸光度检查
在速率法的分析项目中,当样品活性/浓度太高时,使得测光区域的测光点吸光度超出反应界限吸光度(下降反应吸光度小于反应界限吸光度;上升反应吸光度大于反应界限吸光度),即在反应过程中快速消耗掉了试剂中的底物,发生底物耗尽现象,仪器就会输出数据警报“>Reac0、>Reac1、>Reac2”。但要注意:4个点在反应界限内时,仪器会自动修正——使用前4个点的吸光度计算浓度/活性,得出正确结果,减少复查。
在检查反应界限吸光度时,仪器会根据样品混浊等原因自动修正输入反应界限吸光度。
修正后的反应界限吸光度=输入的反应界限吸光度值+k(L1-Lb)
k :液体量修正系数
L1 :测光点1处的样品主波长吸光度
Lb :测光点1处的试剂空白主波长吸光度
k=(s+R1)/(S+R1+R2)
针对疑问1,我们还需要查看反应界限吸光度参数及反应过程吸光度:
图3 - AMY分析参数
从图3 中得知,AMY的测光点为30,36,反应界限吸光度参数为32000,上升反应;
图1的反应界限吸光度修正为56817,图4测光区域(30-36)主波长吸光度为55743,均小于反应界限吸光度修正值56817,因此未发生反应界限报警。
当吸光度大于3.3ABS时,仪器会输出“>ABS”的数据报警,此种情况一般为样品浓度太高、样品浑浊、试剂失效等原因造成,往往需要稀释来复查。
“>ABS”的报警会使用“测光点1”及测光区域“测光点P1(30)~P2(36)”来进行检查。同时根据分析方法,反应方向进行检查测光点确认。
对于速率A法,上升反应,为了保证“>ABS”检查的准确性,会使用“测光点1”的吸光度来进行检查。此例中“测光点1”的吸光度为主波长:32689、副波长:638,均小于“>ABS”报警界限,因此未发生数据报警“>ABS”。
图4 - Amy反应过程吸光度
PART03
小结
此例Amy为“0”结果的数据,仪器未发生报警提示的情况下往往会产生假阴性的结果,从反应曲线及复查结果来看发生了底物耗尽的现象。但仪器未发生底物耗尽的原因为反应界限吸光度参数设置不良导致,因此需要调整反应界限吸光度参数,使仪器能正确的发生报警。
· 想了解更多的底物耗尽内容可点击该链接——细说酶活性测定的底物耗尽
西北事业部
唐文飞
日立诊断 未来可期
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