论文解析 | BeaverBeads®蛋白纯化磁珠助力科学家揭示CRISPR-Cas系统适应阶段新机制
本研究利用His标签蛋白纯化磁珠,纯化带有His6- MBP标签的Cas1、Cas2、Cas4 三个蛋白,结合MBP Pull-down分析,揭示Cas1、Cas2、Cas4 三个蛋白间的互作关系。
论文解析2021年2月,四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室陈强教授团队,在Nucleic Acids Research在线发表了标题为:
"Mechanisms of spacer acquisition by sequential assembly of the adaptation module in Synechocystis" 的研究成果。
该团队研究人员通过利用His标签蛋白纯化磁珠(BeaverBeads® IDA-Nickel cat. 70501),纯化带有His 6-MBP标签的Cas1、Cas2、Cas4三个蛋白,结合MBP Pull-down(图1)分析及其他生物化学实验,揭示了Cas1、Cas2、Cas4 三个蛋白间的互作关系,并且解析了Cas1-Cas2-Spacer三元复合物的晶体结构(图2)和Cas1-Cas4二元复合物的电镜负染结构(图3),阐明了Cas4参与外源DNA捕获与整合的新机制。
图1.MBP pull-down分析
图2.Cas1-Cas2-Spacer三元复合物结构
图3. Cas1-Cas4二元复合物结构
该团队认为,在I-D 型系统中,Cas4和Cas2会竞争性地与Cas1结合,可以形成 Cas1-Cas4和 Cas1-Cas2-Spacer 两种复合物,这两种复合物按次序先后参与间隔序列的整合。I-D型系统的间隔序列整合分为两个步骤:1)间隔序列的加工;2)间隔序列的整合。在此过程中,Cas1-Cas4复合物通过Cas4的PAM序列特异性的内切酶活性对间隔序列进行识别和加工,加工成熟的间隔序列又与Cas1、Cas2形成比Cas1-Cas4复合物更加稳定的Cas1-Cas2-Spacer复合物,将间隔序列插入到CRISPR位点,完成间隔序列的整合。
CRISPR-Cas基因编辑技术已经广泛应用于全球实验室,对CRISPR-Cas系统更加深入的了解不仅拓宽了人类的知识边界,还有助于开发更新一代的基因编辑工具。(部分内容来源于网络)
海狸蛋白纯化磁珠,可通过磁性分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白,可搭配自动化纯化仪,实现高通量纯化蛋白,极大地简化纯化工艺和提高纯化效率,适合科研和工业领域便捷地进行蛋白纯化。
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