【应用分享】高油脂中药木香的33种农残测定分析
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中药木香
33种农残测定分析
木香为菊科植物木香的干燥根,含大量油脂类成分。这些成分对GC/MS/MS色谱柱污染较为严重,易造成目标保留时间漂移和丢峰,常规的固相萃取法一、固相萃取法二、固相萃取法三都不能很好的净化。因此纳谱分析根据木香油脂成分特点,在优化填料的同时优化了木香的提取方式。优化后的方案可以有效地减轻木香GC/MS/MS分析中存在的问题,降低了样品中油脂成分对色谱柱的污染和基质效应。
今天,我们来看看木香项目的前处理效果吧~
适用范围
本方法参考中国药典2020版2341第五法中的快速样品处理法(QuEChERS)法。实验步骤
一
对照品溶液的配制
1.1 混合对照品配制
1.2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备
取磷酸三苯酯对照品适量,精密称定,加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液,即得。精密量取适量,加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。1.3 空白基质溶液的制备
取木香空白基质样品,同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。1.4 基质混合对照溶液的制备
分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份),置氮吹仪上,40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL,分别加入混合对照品溶液10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL,加乙腈稀释至1 mL,涡旋混匀,即得。二
供试品溶液的制备(QuEChERS法)
2.1
GC-MS/MS样品
2.1.1
提取
取木香粉末(过3号筛)3 g,精密称定,置50 mL聚苯乙烯具塞离心管中,加入水15 mL,涡旋使药粉充分浸润,放置30 min,精密加入乙腈15 mL,涡旋使混匀,置振荡器上剧烈振荡(500次/分)5 min,加入QS-002盐包,立即摇散,再置振荡器上剧烈振荡(500次/分)3 min,于冰浴中冷却10分钟,离心(4000转/分)5分钟,待净化。2.1.2
净化
SPE净化管:Q-15A06 SelectCore QuEChERS净化管15 mL, Pesticide Residue A06(含色素挥发油中药农残Q法)净化:取上述提取液上清液9 mL置Q-15A06净化管中涡旋使充分混匀,置振荡器上剧烈振荡(500次/分)5分钟使净化完全,离心(4000转/分)5分钟,即得。2.1.3
分析
GC-MS/MS测定:精密吸取上清液1 mL,置氮吹仪上于35 ℃水浴浓缩至约0.4 mL,加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0 mL,涡旋混匀,再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液,混匀,过0.22 μm滤头,上机分析。2.2
LC-MS/MS样品
2.2.1
提取
取木香粉末(过3号筛)3 g,精密称定,置50 mL聚苯乙烯具塞离心管中,加入1%冰醋酸溶液15 mL,涡旋使药粉充分浸润,放置30 min,精密加入乙腈15 mL,涡旋使混匀,置振荡器上剧烈振荡(500次/分)5分钟,加入QS-002盐包,立即摇散,再置振荡器上剧烈振荡(500次/分)3分钟,于冰浴中冷却10分钟,离心(4000转/分)5分钟,待净化。2.2.2
净化
Q法净化管:Q-15A06 SelectCore QuEChERS净化管15 mL, Pesticide Residue A06(含色素挥发油中药农残Q法)
净化:取上述提取液上清液9 mL置Q-15A06净化管中涡旋使充分混匀,置振荡器上剧烈振荡(500次/分)5分钟使净化完全,离心(4000转/分)5分钟,即得。
2.2.3
分析
LC-MS/MS测定:精密吸取上清液5 mL,置氮吹仪上于35 ℃水浴浓缩至约0.4 mL,加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0 mL,涡旋混匀,再加入0.3 mL水,混匀,过0.22 μm滤头,上机分析。三
气相色谱-串联质谱法
(岛津 GC-MS -TQ8040 NX)
色谱条件
色谱柱:NanoChrom BP-50+MS, 30 m×0.25 mm×0.25 μm;进样口温度:250 ℃;升温程序:初始温度为60 ℃,保持1 min;以10 ℃/min升温至160 ℃;再以2 ℃/min升温至230 ℃,最后以15 ℃/min升温至300 ℃,保持6 min;载气:高纯氦气(纯度>99.999%);进样方式:不分流进样;恒压模式:146 kPa;进样量:1 μL。质谱条件
电离方式:电子轰击电离源(EI);电离能量:70 Ev;接口温度:250 ℃;离子源温度:250 ℃;监测方式:多反应监测模式(MRM);溶剂延迟:10 min。GC/MS/MS监测目标物注意事项:样品浓度为0.2 g/mL;前加标建议加300 μL混合对照品提取,浓度为标准曲线第二个浓度点浓度(20 μL/mL)。由于样品浓度较低,建议分析前重新调谐检查灯丝能量后再进行分析,仪器灵敏度过低可能导致对硫磷丢峰或分析结果不准确。氟虫腈和氟虫腈亚砜 保留时间往后漂移1.8 min左右(参考)
四
高效液相色谱-串联质谱法
(岛津 LC-MS 8045)
色谱条件
色谱柱:ChromCore C18-MS Pesticides, 2.6 μm,2.1×100 mm流动相:A:0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L甲酸铵)B:乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L甲酸铵)=95:5流速: 0.3 mL/min柱温: 40 ℃进样量: 2 µL梯度:
时间 (min) | 流速 (mL/min) | 流动相A (%) | 流动相B (%) |
0 | 0.3 | 70 | 30 |
1 | 0.3 | 70 | 30 |
12 | 0.3 | 0 | 100 |
14 | 0.3 | 0 | 100 |
14.1 | 0.3 | 70 | 30 |
16 | 0.3 | 70 | 30 |
质谱条件
离子源: 电喷雾离子源(Electrospray ionization,ESI)正离子扫描监测方式:多反应监测(Multiple Reaction Monitoring,MRM)离子源接口电压:4.5 kV雾化气:氮气3.0 L/min加热气:干燥空气10.0 L/minDL温度:250 ℃加热模块温度:400 ℃接口温度:300 ℃干燥气:N2 10 L/minLC/MS/MS监测目标物注意事项:地虫硫磷、治螟磷 参考GC/MS/MS结果;
目标物 | 定量离子 | CE电压 | 参考离子 | CE电压 | 保留时间(参考) |
水胺硫磷 | 291.00>231.00 | -15 | 291.00>121.00 | -30 | 5.106 |
表1 木香中33种农药残留的测定添加回收结果(%)
五
处理后溶液的颜色比对
木香基质加标GC/MS/MS部分化合物分析结果对比
a-硫丹(左为直接提取法HLB净化,右为QuEChERS法Q-15A06净化)
β-六六六(左为直接提取法HLB净化,右为QuEChERS法Q-15A06净化)
δ-六六六(左为直接提取法HLB净化,右为QuEChERS法Q-15A06净化)
p,p''-三氯杀螨醇(左为直接提取法HLB净化,右为QuEChERS法Q-15A06净化)
γ-六六六(左为直接提取法HLB净化,右为QuEChERS法Q-15A06净化)
对硫磷(左为直接提取法HLB净化,右为QuEChERS法Q-15A06净化)
甲基对硫磷左为直接提取法HLB净化,右为QuEChERS法Q-15A06净化
水胺硫磷左为直接提取法HLB净化,右为QuEChERS法Q-15A06净化
木香基质加标GC/MS/MS地虫硫磷出峰情况
木香基质加标LC/MS/MS部分化合物分析结果对比
水胺硫磷左为直接提取法HLB净化,右为QuEChERS法Q-15A06净化
六
实验讨论
通过以上实验对比数据可以看出,上述方案搭配SelectCore QuEChERS Q-15A06净化管净化后的木香样品溶液颜色较浅,且各化合物出峰较为良好,目标物保留时间漂移也得到了有效减弱,减少了污染GC/MS/MS柱前端的风险。SelectCore QuEChERS Q-15A06净化管针对木香中油脂类成分去除效果良好,联合上述解决办法有效地提高了实验效率,也为木香的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。
中药农残相关实验耗材
方法类别 | 推荐产品 | 货号 | 适用品种 |
快速样品 处理法 (QuEC-hERS) | SelectCore QuEChERS萃取盐包6g MgSO4, 1.5g NaOAc; 50/pkg | QS-002 | 川桐皮、川赤芍、木通、通草、灯心草、白芍、麦冬、泽泻、益智、姜黄、枸杞、大枣等含碳水化合物和少量色素类 |
SelectCore QuEChERS净化管15mL, 900mg MgSO4, 300mg PSA, 300mg C18, 300mg Silica, 90mg GCB; 50/pkg | Q-15PCSG01 | ||
注意事项:前处理步骤较多,提取效率较为充分,溶液颜色较深,基质标每次只能一个点加入盐包时会放热,注意冰浴降温对杀虫脒有吸附,回收率可能偏低 | |||
SelectCore QuEChERS净化管 15mL, Pesticide Residue A06(含色素挥发油中药农残Q法); 50/pkg | Q-15A06 | 木香、厚朴、羌活等含挥发油和色素类 | |
注意事项:改良后的配方可以吸附更多的色素和挥发油基质 | |||
SelectCore QuEChERS净化管15mL, Pesticide Residue A07(丹参中药农残Q法); 50/pkg | Q-15A07 | 丹参专用 | |
注意事项:改良后的配方提高了丹参农残测定的稳定性和重现性 | |||
固相萃取方法 一 | SelectCore QuEChERS净化管15mL, 1200mg MgSO4, 300mg PSA, 100mg C18; 50/pkg | Q-15PC04 | 基质简单,色素较少如:人参、西洋参、茯苓、白芍、山药、隔山撬、浙贝母、麦冬、葛根、粉葛、川赤芍、赤芍、白附片、川木通、桑白皮、三七、黄芪、甘草、天花粉 |
注意事项:适用于含有较多有机酸和糖干扰的样品,对磺隆类和杀虫脒化合物吸附较强 | |||
固相萃取方法 二 | SelectCore HLB固相萃取柱200mg/6mL; 30/pkg | HLB060-060200-1 | 紫草、北柴胡、陈皮、山楂、大黄、柴胡、当归、党参、地黄、防风、黄芪、桔梗、苦参、益母草、黄精、灵芝、茯苓、大青叶、板蓝根、甘草等含少量色素类 |
注意事项:吸附色素能力相比固相1要好,对滴滴滴类化合物吸附力较强故GCMSMS样品分析不适用,多用于LCMSMS样品净化 | |||
SelectCore HLB-A中药农残专用柱200mg/6mL; 30/pkg | HLBA60-060200-1 | 千年健、桃仁、苦杏仁、花椒、没药、紫苏叶、厚朴、金银花、艾叶、款冬花、乌梅、桑叶、牛蒡子、菟丝子、酸枣仁、莪术、槟榔、小茴香、枳实、郁金、白头翁、菊花、陈皮、白花蛇舌草、褚实子、化橘红、川防风、当归等富含挥发油和色素类气质质测定项目 | |
注意事项:对磺隆类化合物吸附力强,且对三氯杀螨醇类、滴滴滴类化合物具有一定吸附作用,故LCMSMS样品分析不适用,GCMSMS样品分析需5mL样品上柱净化 | |||
SelectCore HLB-B中药农残专用柱200mg/6mL; 30/pkg | HLBB60-060200-1 | 色素较多,挥发油较多如:火麻仁、菟丝子、厚朴、酸枣仁、羌活、川芎、莪术、蛇床子、紫苏叶、姜黄、干姜、陈皮、枳实、青皮、防风、莱菔子、槟榔、当归、小茴香、豆蔻、黄连、黄柏、虎杖、大黄、马钱子、化橘红、当归 | |
注意事项:对滴滴滴类化合物具有一定吸附性,适用于LCMSMS样品分析,3mL样品上柱净化 | |||
SelectCore HLB-C中药农残专用柱500mg/6mL; 30/pkg | HLBC60-060500-1 | 血竭、补骨脂、吴茱萸、沉香、没药、蛇床子、火麻仁、小茴香、马钱子等富含挥发油、色素和生物碱类气质质测定项目 | |
适用于重油重色素和生物碱的果实和种子类中药,GCMSMS样品分析需2mL样品上柱净化 | |||
固相萃取方法三 | SelectCore GCB/NH2-II固相萃取柱500mg/500mg/6mL; 30/pkg | GN100-061000-2 | 色素含量多,含少量挥发油如:金银花、菊花、款冬花、忍冬花、益母草、淫羊藿、龙胆草、大黄、虎杖、何首乌、麻黄、苦丁茶、刘寄奴、山银花、忍冬藤、川牛膝、地黄、桑叶 |
注意事项:洗脱液中有甲苯,毒性较大,且洗脱时间较长;对磺隆类农药有一定吸附LCMSMS样品分析时应联合其他净化方式分析磺隆类数据 | |||
SelectCore GCB/NH2-A固相萃取柱500mg/500mg/6mL; 30/pkg | GNA100-061000-1 | 紫草、黄连、黄柏、何首乌、干益母草、吴茱萸、虎杖、大黄、决明子、胡黄连、苕叶细辛、菊花、千里光、蒲公英、艾叶、荆芥、茵陈、金银花、番泻叶、龙胆草、蛇床子、川乌、草乌、车前子、地耳草、金钱草、薄荷、广藿香、老鹳草、紫苏叶、忍冬藤、栀子、连翘、莲子心、竹叶柴胡、矮地茶、红景天、麻黄、白鲜皮、赶黄草、款冬花等 | |
注意事项:适用于干扰较为严重的GCMSMS样品分析。如若用于LCMSMS样品分析,应联合其他净化方式 | |||
液相色谱柱 | ChromCore C18-MS Pesticides2.6 μm, 2.1×100 mm | S013-026018-02110S | |
气相色谱柱 | NanoChrom BP-50+MS, 30m×0.25mm×0.25 μm | G5025-3002 |
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