浅谈 | 激光共聚焦显微镜特点及应用
在一般的显微镜中通过将物镜的焦平面与探测器重合使得观测的像平面与相邻的轴平面隔离开来,而在共聚焦显微镜中通过使用衍射受限的光点照亮样品,并在该光点共轭焦点处的收集光路径中使用针孔来过滤杂散光达到产生这种隔离效果从而提高分辨率。
成像特点
同一厚样品
多维荧光显微镜和共聚焦显微镜成像比较
成像特点
激光扫描共聚焦显微镜的另一个特点是它是一种扫描成像技术,传统的宽场照明技术是将整个样品都照亮,因此可以图像可以直接被肉眼或探测器捕捉,但是LSCM采用一束或多束聚焦光束穿过样品扫描成像,这样得到的图像被称为光学切片,下所示即为传统的宽场照明方式与激光扫描共聚焦照明方式的区别。
传统宽场显微镜和激光扫描共聚焦显微镜
照明方式区别
一种实际的激光扫描共聚焦显微镜示意图
成像特点
在荧光显微镜中,单点发射的光强度由点扩散函数(PSF)描述,其图案就是一个艾里斑,荧光系统的分辨率可以由艾里斑的半径来描述,艾里斑的半径可以由物镜的数值孔径和激发光的波长决定:
宽场显微镜与共聚焦显微镜成像对比
主要应用领域
—医疗领域—
Li 等人通过LSCM技术对31位虹膜粘连但角膜透明的病人进行了检查,观察到类树干状结构、树枝/灌木状结构、果实特征结构、上皮状结构等一些可能的结构变异,同时发现颜料粒子的减少可能会导致廷德尔积极现象[1]。
主要应用领域
小鼠大脑运动纤毛图像
小鼠膀胱
主要应用领域
—高分子化学领域—
主要应用领域
—表面粗糙度领域—
NCF950
激光共聚焦显微镜
无级变速小孔控制单层图像景深,获取更佳图像质量。 四荧光通道同时或分时成像,提高效率&消除串色。 Z序列层扫,定量分析更轻松准确。 20nm步进精度,还原厚样本空间结构。 4096×4096图像一键生成,支持大图拼接,软件操作便捷。 光强度只有汞灯1/1000,长时间实验观察不损伤样本。
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