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【qPCR的"有料"秘笈】ROX助力,让实验结果"稳如老友"!

TIANGEN
2023.12.07

做荧光定量 PCR(qPCR)实验时

你是否也有过这样的疑问:

ROX要不要添加,倒底应该加多少?

 ROX的作用原理

ROX是一种惰性参比染料,“惰性”的意思是,不论PCR扩增循环数如何增加,ROX的荧光信号依然稳定如初。

实验中经常会出现一些物理因素的干扰,如加样孔中的气泡、qPCR 管盖的厚度差异以及 qPCR 仪本身的光程差等,这些都会导致SYBR Green荧光信号强度的变化。为了校正误差,在qPCR反应体系中加入等量的ROX,利用每个反应体系中的惰性染料ROX荧光强度做为矫正基准,对SYBR Green的荧光强度进行归一化处理,来修正 SYBR Green 荧光信号强度,保证实验结果的准确性。

 ROX的使用建议

那么,不同qPCR仪需要添加多少ROX呢?有的仪器不需要加入ROX,如TGreat Real 96荧光定量PCR仪、Roche、Bio-Rad等;有的则需要添加,如 ABI、Agilent Stratagene 等。不同仪器需要加入的ROX浓度也各有不同。

我们以TIANGEN定量明星产品FastReal 快速荧光定量PCR预混试剂 (SYBR Green)(目录号: FP217)为例,详细列出了不同仪器的ROX添加量。

不同qPCR仪器的ROX添加量

FastReal 快速荧光定量PCR预混试剂

 (SYBR Green)(目录号FP217)

助你快速高效完成荧光定量实验

扩增曲线起峰早,荧光值高,特异性强

可兼容快速和普通qPCR仪

透明试剂管,方便观察试剂余量

实验例

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