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参考报价: | 面议 | 型号: | 流式细胞术检测细胞凋亡 |
品牌: | 威斯腾 | 产地: | 全国 |
关注度: | 暂无 | 信息完整度: | |
样本: | 暂无样本 | 典型用户: | 暂无 |
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一、备用试剂
1. 结合缓冲液(10X ): 0.1 M HEPES, pH 7.4; 1.4 M NaCl; 25 mM CaCl2 . 稀释到1X 工作液备用;
2. 碘化丙碇Propidium Iodide (PI). 用PBS稀释到50 μg/ml备用,建议与Annexin V-FITC联合使用;
3. 7-AAD. 推荐与Annexin V-PE或者Annexin V-Biotin 联合使用;
4. 1X PBS 室温储存备用;
二、染色步骤
1、用预冷的PBS洗涤细胞两次,之后用1X的结合缓冲液重悬细胞, 调节细胞浓度到1X106Cells/ml;
2、取100μl调节好浓度的细胞悬液到5ml流式管底部;
3、加入Annexin V标记蛋白和相应的核酸染料(标记的Annexin V与核酸染料均需要摸索到合适的使用浓度,商品化试剂盒按照说明书操作);
4、均匀混合,室温避光反应15分钟;(若是用Annexin V-Biotin标记蛋白染色,反应后用1X的结合缓冲液洗涤细胞一次,再加入合适浓度的标记链霉亲和素Streptavidin,再加入合适的核酸染料,室温避光反应15分钟)
5、向流式管中加入400μl 1X的结合缓冲液,重悬后及时上流式细胞仪进行分析.
三、操作注意事项
1、补偿对照管很重要;
2、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞;
3、细胞浓度与染色用的蛋白量要合适;
4、对不同药物浓度和药物作用时间要进行摸索;
四、仪器:
实验所用的流式细胞仪为COULTER EPICS XL。
五、样本要求:
1)单个细胞:1~2×106 个细胞左右;来源于人、小鼠、大鼠或其它。
2)外周血:EDTA或肝素抗凝全血,5ml左右;来源于人、小鼠、大鼠或其它。
注:
1、 部分常用荧光探针,如PI等,我公司可免费提供,;特殊标记物,如CD抗体等,用户须另行购买,也可委托我公司代购;用户所提供抗体应可与样本发生特异性识别反应。
2、由用户提供的样品或试剂所致的实验问题由用户负责。
附:流式细胞术检测样品推荐制备方法:
细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品(PI染色)的制备:
(1)待测样本制成单细胞悬液,然后200g离心5分钟,弃上清。
(2)用4℃预冷的70%冷乙醇固定,4℃保存,至少固定18小时。
(3)调整细胞浓度为106细胞/毫升,取1毫升细胞悬液,用PBS洗三次,细胞重悬于1毫升PI染液中,37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
(4)PI染液终浓度为50微克/毫升,RNase A终浓度为20微克/毫升。
流式细胞术检测细胞凋亡信息由威斯腾生物为您提供,如您想了解更多关于流式细胞术检测细胞凋亡报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。
注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途