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慢病毒介导RNAi干扰联合化学疗法在肺癌治疗中的研究

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参考报价: 面议 型号: 慢病毒介导RNAi干扰联合化学疗法在肺癌治疗中的研究
品牌: 威斯腾 产地: 全国
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案例:凋亡抑制蛋白xx在肺癌中的表达及其功能的研究    实验分组为:未转染组,阴性对照组,阳性对照组(实验组)

1、 靶向xx基因的RNA干扰对肺癌生物学功能影响的研究     
1.1 构建针对XX基因的进行RNA干扰的病毒载体
1.2 将该病毒载体转染入高表达xx基因的肺癌细胞株。
1.3 检测干扰前后Caspase-3, Caspase-9酶的活性情况  
1.4 生物学功能检测。
 (1) MTT检测细胞增殖情况
 (2) 流式细胞仪检测细胞周期
 (3) 流式细胞仪检测细胞凋亡
 (4) TUNEL检测细胞凋亡
 (5)电镜观察细胞凋亡
 (6) 平板克隆实验检测细胞增殖
 (7) 检测细胞侵袭转移情况

 2. 干扰后肺癌细胞生物学功能的检测:
 转染分组为:未转染组,阴性对照组,化疗药组,化疗药联合RNA干扰组

(1)RNA干扰联合化疗药(自选)对肺癌生物学功能影响的研究;   
(2)构建病毒载体同上。

 生物学功能检测
 (1) MTT检测细胞增殖情况

 (2) 流式细胞仪检测细胞周期
 (3) 流式细胞仪检测细胞凋亡
 (4) TUNEL检测细胞凋亡
 (5)电镜观察细胞凋亡
 (6) 平板克隆实验检测细胞增殖
 (7) 检测细胞侵袭转移情况
 
3.动物实验
 RNA干扰动物实验
(1)将肺癌细胞注射到裸鼠(4-6周龄)皮下,同时将培养稳定生长的干扰的细胞株也注射入裸鼠上,或者当肿瘤长大后将干扰病毒直接注入裸鼠肿瘤中,裸鼠分组为:正常细胞组,阴性对照组(注射生理盐水或其他阴性对照),RNA干扰组。处理后观察后裸鼠肿瘤的生长情况。
(2)处理后观察半个月到一个月,然后将裸鼠处死,取下肿瘤标本,免疫组化,实时定量PCR,Western blot方法中 的检测目的基因的表达变化。
(3)对取下的肿瘤标本采用TUNEL检测细胞凋亡,电镜观察细胞凋亡。

4.蛋白组学和质谱分析
将RNA干扰前后的目的细胞进行蛋白组学研究,寻找差异蛋白。找到的差异蛋白进行质谱分析后用WB来鉴定。

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