1. 背景

环特生物是中国首家斑马鱼生物技术研究开发企业，专注于药物与大健康产品研发及毒理学评价等领域的技术外包服务，是中国首家通过aaalac国际认证的斑马鱼研发机构，也是国家高新技术企业和国家火炬计划企业。环特生物参与研发的6个创新药物已在申报临床批件，其中两个已被批准进行临床试验。

本项目参照（OECD 229）利用斑马鱼进行生殖毒性评价，评价指标主要有：

雌鱼生殖能力评价、性腺生长评价、性腺病理组织切片和卵黄蛋白原（VTG）含量检测及下丘脑-垂体-性腺（HPG）轴线相关基因表达量检测。

2. 方法及结果

   我们利用斑马鱼模式生物，通过水溶或注射给药，评价待测药物的生殖毒性。评价方法及指标如流程图所示。

3. 模型优缺点

  近年来，男女不育不孕以及畸形儿发生率不断升高，越来越多的毒理学、病理学专家开始探索生殖系统疾病高发病率的原因。随着经济的不断发展，人们的生活环境也发生了很大的改变，越来越多的人工合成药剂、保健品等投入使用，环境污染日益严重等，这些是改变人们生活环境的直接原因。药物引起的内分泌干扰毒性是制药业面临的毒理学问题之一，内分泌干扰毒性最终可导致生殖毒性。利用哺乳类动物进行生殖毒性评价的研究已经有很多（Lilienthal et al., 2006； Kuriyama et al., 2005； Stoker et al., 2005；Tseng et al., 2006)。研究内容主要集中于：（1）病理组织切片，验证精巢或卵巢结构是否出现病变；（2）评价精子质量，精子活力、精子密度是否发生显著下降，（3）亲代暴露后，在子代中产生毒性作用，子代在胚胎早期发育中表现出多种毒性效应。然而，利用哺乳动物进行生殖毒性评价周期长、成本高，并且难以实现高通量评价。近几十年来，斑马鱼作为一种国际热点脊椎动物模式生物，在不同的毒理学标准试验中被推荐使用，而在利用斑马鱼进行生殖毒性评价时其主要指标有（OECD 229）：（1）性腺生长指标（gonad weight，GSI））；（2）雌鱼生殖能力（产卵量）；精子质量评价；（3）生殖腺病理组织切片；（4）卵黄蛋白原（VTG）表达含量检测；（5）下丘脑-垂体-性腺（HPG）轴线相关基因表达。

研究表明具有雌激素干扰效应类化合物（EDCs）改变HPG轴线基因的表达（Liu et al., 2010）。分子水平对基因表达量变化的分析已成为探索致毒机制的重要手段（Deng et al., 2010）。下丘脑-垂体-性腺（HPG）轴线相关基因表达分析已成为衡量内分泌系统功能的重要方法，为深入开展生殖系统相关信号通路、基因功能等研究奠定了基础。利用斑马鱼来评价药物、化学品等生殖毒性，可以缩短实验周期、降低实验成本、实现高通量的筛选。