iTRAQ

背景简介：

iTRAQ和TMT的技术原理一样，所不同的是二者的分子结构有差异。与SILAC相比（标记蛋白质），iTRAQ和TMT是对肽段进行标记的。依据iTRAQ/TMT标签的质量数差异，通过MS实现对多组样品中的蛋白质进行相对定量：

SILAC是通过MS( MSl)对蛋白质进行定量，而iTRAQ/TMT是通过二级MS( MS/MS．MS2)进行定量的；

iTRAQ/TMT兼容性好，并且能同时分析多达8-10组的样品，分析通量高。

试验流程

1、分别提取蛋白质并定量；

2、Trypsin分别对蛋白进行酶解，提取肽段；

3、用不同质量数的iTRAQ/TMT标签分别对肽段样品进行标记：

4、标记完成后，混合样品，用SCX进行组分分离（15-20组分）；

5、对每个组分进行LC-MS分析：

6、蛋白质鉴定与定量分析，筛选差异表达的蛋白；

7、生物学实验验证（Western blot，EUSA等）：

蛋白质组学

蛋白质组分析(proteomics) 是对生物蛋白组(proteome) 的分析与检测，蛋白组分析首先要将混合蛋白质分离, 分离的主要方法是蛋白双向电泳。已被分离的蛋白质由质谱分析对其进行鉴定。

iTRAQ的4种同位素标记试剂由４种相对分子质量分别为114、115、116和117的报告基团(reporter group)，相对分子质量分别为31、30、29 和28 的质量平衡基团(balance group)以及一个相同的肽反应标记试剂基团(peptide reactive group)组成。不同的报告基团分别与相应的平衡基团相配后，相对分子质量均为145，即等量异位标签(isobaric tag)。

    将蛋白质裂解为肽段，然后用iTRAQ试剂进行差异标记。由于iTRAQ试剂是等量的，即不同同位素在标记同一多肽后在第一级质谱检测，分子量完全相同，用串联质谱方法对在第一级质谱检测到前体离子(precursor ion)进行碰撞诱导解离，产物离子通过第二级质谱进行分析。在二级质谱分析过程中，报告基团、质量平衡基团和多肽反应基团之间的键断裂，质量平衡基团丢失，产生低质荷比(m/z)的报告离子。由于二级质谱可分析相对分子质量相差1的报告基团，不同报告基团离子强度的差异就代表了它所标记的多肽的相对丰度。同时，多肽内的酰胺键断裂，形成一系列b 离子和y 离子，得到离子片段的质量数，通过数据库查询和比较，可以鉴定出相应的蛋白质前体.
 
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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途