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参考报价: | 面议 | 型号: | 外周血PBMC分离 |
品牌: | 晶莱生物 | 产地: | 全国 |
关注度: | 暂无 | 信息完整度: | |
样本: | 暂无样本 | 典型用户: | 暂无 |
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人外周血单个核细胞(Peripheralblood mononuclear cells ,PBMCs )的分离制备:
1)医院及其血液中心采取的新鲜的肝素抗凝的2ml外周静脉血备用;
2)将肝素抗凝的静脉血用等体积的PBS稀释并充分混匀;
3)将人淋巴细胞分离液ficoll从 4 °C 取出,恢复至室温,取4ml转移至15ml 试管中备用;
4)用无菌吸管吸取稀释后的静脉血,沿管壁缓慢入至人淋巴细胞分离液液面上
(ficoll分离液:抗凝血1:1),缓缓地不要晃荡,保持界面的清楚;
5)将加完外周静脉血后的 50 ml 试管放入台式离心机中,2200 rpm 水平离心,
室温 25 min,注意离心机升降速都调至最慢,降速设置中一定要设置成no break,或者只有1成的制动。
6)离心完毕后,小心取出15 ml 试管,离心后管内可分为三层,在上、中层界面处有一层以单个核细胞为主的白色云雾层狭窄带,即为我们所需要的单个核细胞;
7)用无菌吸管吸取白色云雾层狭窄带的单个核细胞,并置于另一 15 ml 离心管
中,加入5mlPBS,1500 rpm,室温离心 5min,并充分洗涤细胞两次;
8)末次离心后,弃去上清,加入完全 RPMI 1640 培养液重悬细胞,充分混匀;
9)用白细胞计数液计数单个核细胞,根据实验所需,加入完全 1640培养液调整细胞浓度到所需要的浓度。
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注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途