流式细胞检测技术服务

 流式细胞检测技术服务
1、检测项目：
   (1)细胞周期细胞   （2）细胞凋亡    (3)免疫细胞分型     (4)表面抗原鉴定          (5)细胞内钙离子检测   (6)线粒体功能      (7)细胞分选
2、样本及来源：
    1) 单个细胞：1~2×106 个细胞左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
    2) 外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
 
说明：
1、  实验所用的流式细胞仪为COULTER EPICS XL。
2、  送检样本量：
        1)、单个细胞：1~2×106 个细胞左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
        2)、外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
3、  用户需要进行流式细胞仪检测时须提前预约，同时说明实验目的、方法等。一次送检标本数不少于10个。如果一次送检标本总数不足10个，每个测试费用为标准收费×2。
4、  我公司在正式接受实验委托一周内交付实验结果。所提供实验结果忠实于样本的实际情况。
5、  用户须一次性全额预付实验费。
6、  部分常用荧光探针，如PI等，我公司可免费提供，；特殊标记物，如CD抗体等，用户须另行购买，也可委托我公司代购；用户所提供抗体应可与样本发生特异性识别反应。
7、  由用户提供的样品或试剂所致的实验问题由用户负责。
8、  请在表中说明检测具体要求（可另附页），由于填写资料不详所致任何问题由用户负责。
9、  请在送样的同时提供样本来源及处理方法等信息，样品检测后原则上本公司不负责保存。
客户提供：
（1）标本:组织、细胞、全血（抗凝）
（2）抗体（荧光素标记）
        PE最强，适用于弱表达抗原
        FITC*便宜，适用于强表达抗原，适用范围广
        biotin-avidin不适合 弱抗原的检测
（3）其他试剂（如Fluo-3）
（4）染色试剂盒
 附：流式细胞检测样品推荐制备方法：
 
A. 直接标记抗体（FITC标记抗体）：
    (1) 、收集1×106个细胞，800rpm离心5min，4℃以上冷PBS洗一次。
    (2) 、用4%多聚jia 醛1ml室温固定40分钟，800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞，800rpm离心5min。
    (3) 、用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞，冰上孵育10min，800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚jia 醛固定，待测即可。
    (4) 、用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
 
B. 未标记抗体间接免疫荧光标记法：
    (1)、收集2×106个细胞，用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次，800rpm离心5min。
    (2)、用2ml 4%多聚jia 醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min；2ml PBS重悬细胞，800rpm离心5min；
    (3)、用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞，冰上放置10min,800rpm离心5min。
    (4)、加入饱和剂量未标记抗体，冰上放置40min,800rpm离心5min，用2ml冷的PBS 重悬细胞，800rpm离心5min，洗去未结合一抗，重复一次。
    (5)、加入荧光标记（FITC）标记的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm离心5min，去上清，PBS洗涤两次。
    (6)、加入0.5ml 1%多聚jia 醛重悬细胞；固定待测。
    (7)、流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
 
C.细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品（PI染色）的制备：
    (1)、待测样本制成单细胞悬液，然后2000转/分离心5分钟，弃上清。
    (2)、用4℃预冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小时。
    (3)、调整细胞浓度为106细胞/毫升，取1毫升细胞悬液，用PBS洗三次，细胞重悬于1毫升PI染液中，37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
    (4)、PI染液终浓度为50微克/毫升，RNase A终浓度为20微克/毫升。