蛋白等电点测定

蛋白等电点定义

蛋白质表面存在一些侧链离子基团，如氨基、羧基、酚基、巯基等酸碱性基团，因此蛋白质和氨基酸一样本身带有净电荷。在不同pH的溶液中解离所带的正负电荷不同，在某一PH值的溶液中，其解离的正负电荷相等，这时的PH值就称为蛋白的等电点（isoelectric point, pI）。蛋白质的等电点与其空间结构有关，因此对于某一特定蛋白质来说其等电点也是固定的。

蛋白等电点测定

当蛋白质处于与其等电点相同PH的溶液中时，在该溶液中的溶解度最小，可以从溶液中沉淀出来，故蛋白质等电点常用于蛋白质的分离和提纯。蛋白等电点的测定方法有传统的沉淀法和经典的等电聚焦法等。

沉淀法利用蛋白质在等电点时溶解度最低的原理，在醋酸与醋酸钠配制的不同pH缓冲液中加入待测的样品蛋白质，比较其在不同pH的缓冲液中的沉淀量，沉淀量最多的缓冲液所对应的pH就是该蛋白的等电点。

等电聚焦法利用蛋白质在等电点时净电荷为零的原理将待测蛋白质在特殊的缓冲液中进行聚丙烯凝胶电泳，这种特殊的缓冲液为两性电解质，可以在凝胶内形成连续的pH梯度，当电泳完毕时，蛋白质迁移到的位置对应的pH就是该蛋白质的等电点。

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