microRNA-RTFQ PCR

定义：微小RNA(microRNA，简称miRNA)是生物体内源长度约为20－23个核苷酸的非编码单链小分子RNA，通过与靶mRNA的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行负调控，导致mRNA的降解或翻译抑制。是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（双链）但是和siRNA密切相关。普通实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料，对荧光信号实时检测进而了解整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

特点：而对于成熟的microRNA而言，其片段由21-25个核苷酸组成的小RNA，长度太短，并不能通过传统的实时定量PCR进行检测。这样的话，就需要对其引物设计方面有较高的要求，既可以通过特殊设计的茎环结构的反转录引物，也可以通过对目的片段终端的改造再设计引物，而后配合实时定量PCR可以精确检测微量样品中microRNA表达水平，也可以用终点PCR法定性检测。

一般实验过程如下图：
 

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