EdU（5-Ethynyl-2'-deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见，能够在

DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中，基于Apollo®荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并

准确地检测出DNA复制活性，广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复、病毒繁殖等方面的研究

，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及各种药物的细胞增殖及活力筛选实验。

传统的免疫荧光染色（BrdU）检测方法需要DNA变性，抗原修复，抗原抗体过夜孵育，操作步骤复杂繁琐。

并且由于BrdU抗体分子较大，嵌入DNA分子中的BrdU无法直接与BrdU抗体结合，必须先进行DNA变性操作才能使

BrdU抗原表位暴露，但变性的程度可能导致错误结果。如果变性不充分，会导致BrdU难以暴露，无法检测，而且变

性过程从边缘向中间渗透，会导致细胞核DNA的变性不均匀，边缘模糊不清。如果变性过分，则会导致DNA断裂，

甚至降解，导致核染不均一。另外，不同抗体试剂公司的抗体质量不一致，造成难以确保实验重复性，且容易产生

假阳性结果。

更准确--无需DNA变性(酸解、热解、酶解等)，可有效避免变性带来的样品损伤，确保细胞核边缘清晰完整；

更简单--无需抗原抗体反应，基于小分子化学反应的检测方法，简单高效，反应仅需要几分钟；

更灵敏--无需抗体，检测染料仅为BrdU抗体的1/500，更容易扩散，即使单个增殖细胞也能准确检测；

更快速--无需过夜，省却了抗原抗体反应的复杂繁琐步骤，完成整个检测周期仅需2.5小时；

更兼容--对样品几乎无损伤，更容易与多种抗体或荧光蛋白同时标记，能够同时检测细胞其他性状特征。

EdU染色可以通过流式细胞术、共聚焦、荧光显微镜等平台完成。

博恩生物为客户提供多种细胞活力、细胞增殖检测技术手段：

MTT、CCK8、SRB、CFSE标记、Ki67染色、EdU、克隆形成

MTT法：MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸

脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。

二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映

活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子

的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿liu放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。

CCK-8法：CCK-8试剂盒是Cell Counting Kit-8的简称。其原理是用WST-8四唑盐（2-(2-methoxy-4-nitrophe

nyl)- 3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium）能被活细胞内的脱氢酶还原成橙色甲臜染料，

然后测定450 nm下的吸光值，生成的甲臜的量与活细胞数量成正比。

SRB法：磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B，SRB)比色法，主要用来检测细胞增殖情况。SRB是一种粉红色阴离子

染料，易溶于水，在酸性条件下可特异性地与细胞内组成蛋白质的碱性氨基酸结合；在540 nm波长下产生吸收峰，

吸光值与细胞量成线性正相关，故可用作细胞数的定量检测。SRB染色后不会像MTT法那样很容易变色，细胞固

定染色后在96孔板中可以放置较长时间，因而受测定时间的影响较小。用Tris-base溶液溶解的SRB也可稳定较长

时间。因此不同时间点固定的96孔细胞培养板可在同一时间测定，测定的吸光值结果不会受到明显影响。吸光值

与SRB浓度作图时，在OD单位1.5—2.0以下为线性，当超出线形范围时，稀释后重新读数。虽然SRB法比其他检

测方法操作步骤繁琐，但是由于时间可以自己掌握，不受限制，因此适用于高通量筛选。

CFSE标记法：荧光染料CFSE， 也可称为CFDA SE（5，6- carboxyfluorescein diacetate，succinimidyl ester）

 即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂，是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基

团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，这使得CFSE成为一种良好的细胞标记物。

当CFSE以含有两个乙酸基团和一个succinimidyl ester功能基团的形式存在时，不具有荧光性质，而具有细胞膜通

透性，能够自由进入细胞；而当其扩散进入细胞内环境，内源的酯酶可将其乙酸基团水解，此种形式的CFSE分子具

有很高的荧光活性，被激发能够产生绿色荧光，却不再具有膜通透性；同时，其含有的succinimidyl ester基团能

与胞内的细胞骨架蛋白中的游离胺基反应，形成具有荧光的蛋白加合物。

因此，当细胞进行分裂增殖时，具有荧光的胞质蛋白被平均分配到第二代细胞中，这样与第一代细胞相比，其荧光

强度便会减弱至一半；以此类推，分裂得到的第三代细胞的荧光强度便会比第二代细胞再次减弱。这种现象可以在

488nm的激发光下，采用流式细胞术检测分析，通过检测到细胞荧光强度不断的降低，进一步分析得出细胞分裂

增殖的情况。

Ki67染色：Ki67 是一种标记细胞增殖状态的核抗原，主要表达于 G1 期、S 期、 G2 期及有丝分裂间期的细胞，

但在 G0 期即静息状态的细胞中不表达。其功能与细胞增殖密切相关，因此 Ki67 常用于检测细胞的生长指数。 

EdU细胞增殖检测：EdU（5-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期

代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子中，通过基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应快速检测细胞

DNA复制活性，适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究，

尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。

与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU染料只有BrdU抗体的1/500，在细胞内很容易

扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等），可有效避免样品损伤，而且无需抗原抗体反应，能在细胞和组织水平

更准确地反映DNA复制活性。

克隆形成实验：细胞克隆形成实验是用来检测细胞增殖能力、侵袭性、对杀伤因素敏感性等的重要技术方法。实验

方法包括平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大，正常

细胞克隆形成率弱，细胞强；初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系

强。由于克隆形成率与接种密度有一定关系，做克隆形成率测定时，接种细胞一定要分散成单细胞悬液，随时检查，

到细胞形成克隆时终止培养。

当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小

在0.3-1.0 mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。

通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测，细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴

壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有

增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。

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