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NO(RNS)检测

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参考报价: 面议 型号: NO(RNS)检测
品牌: 博恩生物 产地: 南京
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NO(RNS检测)可以采用DAF-FM或者giress法检测。前者为半定量,可使用酶标仪、流式细胞术检测。后者为

定量检测。

1、DAF-FM探针

DAF-FM探针是最新一代用于一氧化氮定量检测的荧光探针,比以前比较常用的一氧化氮荧光检测探针DAF-2 

diacetate有多方面的改进。首先,DAF-FM DA和DAF-2 diacetate相比,最后和一氧化氮反应形成的荧光产物受

pH值的影响小,在pH值大于5.5时不受pH值的影响。其次,DAF-FM DA和DAF-2 diacetate相比,前者产生的荧

光更加稳定,不容易淬灭,这样更加便于检测。另外,DAF-FM DA和DAF-2 diacetate相比,前者对一氧化氮的检

测灵敏度更高,相同条件下检测灵敏度可以提高接近2倍,检测浓度可以达到3nM。

DAF-FM DA可以穿过细胞膜(cell-permeable),进入细胞后可以被细胞内的酯酶催化形成不能穿过细胞膜的DAF

-FM。DAF-FM本身仅有很弱的荧光,但在和一氧化氮反应后可以产生强烈荧光,激发波长为495nm,发射波长为

515nm。DAF-FM DA检测一氧化氮的机制可以参考上图。任何可以检测fluorescein的仪器,包括荧光显微镜、激

光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计或荧光酶标仪都可以用于该荧光探针的检测。下图为DAF-FM在不

同浓度一氧化氮存在时的发射荧光扫描图谱。


2giress法

NO在体内或水溶液中极易氧化成NO22-和NO33-,NO33-可通过镉被还原为NO22-  。NO22-在碱性条件下和磺

胺作用生成重氮化合物(重氮盐),再与N-1-  萘基乙二胺盐酸进行偶联反应(保留氮反应),生成有颜色的化合物,通

过分光光度法比色,  在波长546nm下测定吸光度,并制作标准曲线,通过曲线可求得样品中NO含量。


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