流式细胞术检测凋亡

实验方法

1．用6孔板培养细胞，待细胞生长达到60%-70%，吸出旧培养基，根据实验需求处理，继续培养。

2．根据实验处理时间，把细胞培养液吸出至一合适离心管内，PBS洗涤贴壁细胞一次，加入适量胰酶细胞消化液消

化细胞。室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶细胞消化液。需避免胰酶的过度消化。（注意：

悬浮细胞不需要胰酶消化，直接收集到离心管即可）

3．加入步骤(2)中收集的细胞培养液，稍混匀，转移到离心管内，1000g离心5min，弃上清，收集细胞，用PBS轻轻

重悬细胞并计数。（注意：加入步骤2）中的细胞培养液一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞，另一方

面细胞培养液中的血清可以有效抑制或中和残留的胰酶；残留的胰酶会消化并降解后续加入的Annexin V-FITC导致

染色失败。

4．取5-10万重悬的细胞，200g离心5 min，弃上清，加入195 μl Annexin V-FITC结合液轻轻重悬细胞。

5．加入5 μl Annexin V-FITC，轻轻混匀。

6．室温(20-25℃)避光孵育10 min。可以使用铝箔进行避光。

7．200g离心5 min，弃上清，加入190 μl Annexin V-FITC结合液重悬细胞。

8．加入10 μl碘化丙啶染色液，轻轻混匀，冰浴避光放置。

9．进行流式细胞仪检测，Annexin V-FITC为绿色荧光，PI为红色荧光。

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