碱性磷酸酶染色

碱性磷酸酶染色原理：测定中性粒细胞内碱性磷酸酶活性。当粒细胞内有碱性磷酸酶存在时，在缓冲液（pH9.0－9.8）中，可将温育液中的底物（β甘油磷酸酶）水解为磷酸根和甘油，磷酸根再与硝suan钙中的Ca2＋结合为磷酸钙沉淀，此沉淀物再与硝suan钴、硫酸铵等起一系列化学反应，最后生成不溶性的黑色硫化钴（CoS)，定位于酶活性所在部位。
碱性磷酸酶染色试剂：
1、固定液，包含甲醇90ml，甲醛10ml。
2、温育液，3.2％β甘油磷酸钠6ml，0.1M硫酸镁溶液6ml，2％硝suan钙9ml，加水至50ml（pH9.8）。固定液及温育液均放在4℃冰箱保存。
3、2％硝suan钴溶液。
4、1：80稀释硫酸铵溶液。
5、2％沙黄溶液。
碱性磷酸酶染色操作：
1、涂片置固定液（4℃，30s）。
2、水洗数秒。
3、放入新鲜温育液，37℃2h。
4、取出后，用水（含有数滴2％硝suan钙溶液）冲洗数秒。
5、侵入2％硝suan钴5min，然后用水冲洗。
6、侵入新鲜配制的1：80硫酸铵中10s，水洗。
7、2％沙黄水溶液中10s复染、水洗。待干（也可用瑞氏染液复染）。
结果：阳性反应呈灰黑色至深黑色颗粒状或片块状沉淀，定位于胞浆中。成熟中性粒细胞有此颗粒。