1) 全蛋白的提取：将细胞用PBS洗涤2遍，每瓶加入RIPA裂解液400ul，用细胞刮迅速将细胞刮下转移到EP管中（剪取约20mg组织于EP管中，加入1ml RIPA裂解液，组织均浆机将组织打碎），将EP管置于冰上裂解30min，12000rpm离心10min，取上清液备用。
2）蛋白定量：将0.5mg/ml的标准品按0、1、2、4、8、12、16、20ul入96孔板中，加水将溶液补足到20ul；取2ul蛋白样品于96孔板中，加水补足到20ul；每孔中加入200ul的BCA工作液，37℃水浴30min，酶标仪上测定A570。
3）向蛋白样品中加入四分之一体积的5x上样缓冲液，煮沸10min。
4）电泳：上层为5%的浓缩胶；下层为12%的分离胶；根据样品蛋白含量调整上样体积，使每泳道的总蛋白量相同。
5）湿式转膜：200mA，2h。
6) 封闭：5%的脱脂奶粉4℃摇动，封闭2h。
7）一抗孵育：1：1000稀释，4℃孵育过夜。
8）二抗的孵育：0.1%的TBST洗膜3次，每次10min，1：1000稀释，室温孵育2h。
9）ECL曝光：0.1%的TBST洗膜3次，每次10min，滴加发光液，压片，冲洗胶片。