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细胞增殖与毒性检测(MTT法)

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参考报价: 面议 型号: 细胞增殖与毒性检测(MTT法)
品牌: 百杰康生物 产地: 湖北
关注度: 暂无 信息完整度:
样本: 暂无样本 典型用户: 暂无
价格范围1-500
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                           MTT是一种粉末状化学试剂,全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,汉语化学名为 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝 。是一种黄颜色的染料。
检测原理:MTT是一种接受氢离子的染料,可作用于活细胞线粒体中的呼吸链,在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下 tetrazolium环开裂,生成蓝色的formazan结晶,formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失,不能将MTT还原)。二甲基亚砜(DMSO )能溶解细胞中的甲瓒,用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值),来判断活细胞数量,OD值越大,细胞活性越强(如果是测药物毒性,则表示药物毒性越小)。
实验步骤
1:收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100u1,铺板使待则细胞调密度1000-10000孔,(边缘孔用无菌PBS填充)。
2:5%00:,37℃孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板),加入浓度梯度的药物,原则上,细胞贴壁后即可加药,或两小时,或半天时间,但我们常在前一天下午铺板,次日上午加药。一般5-7个梯度,每孔100u1,设3-5个复孔。建议设5个,否则难以反应真实情况
3:5%002,37℃孵育16-48小时,倒置显微镜下观察。
4:每孔加入20ulMTT溶液(5mg/m1,即0.5%MTT),继续培养4h。若药物与TT能够反应,可先离心后弃去培养液,小心用PBS冲2-3遍后,再加入含MIT的培养液。
5:终止培养,小心吸去孔内培养液。
6:每孔加入150u1二甲基亚矾,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪0D490rm处测量各孔的吸光值。
7:分析MTT结果



含有以下细胞
Caco-2,MCF-7,HaCaT
 


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