CRISPR-Cas9基因敲入

一、原理及应用介绍

     CRISPR/Cas9系统中sgRNA识别并结合目标基因的靶向序列，引导Cas9对结合位点进行剪切，产生DNA双链断裂，通过细胞内的同源重组（Homologous Recombination,HR）修复方式，将外源供体DNA定点导入至基因组的靶位点中，从而实现基因敲入。

图1.CRISPR/Cas9基因敲入示意图（Eric Murillo-Rodríguez,et al.,Sleep and Vigilance,2018）

应用实例

利用CRISPR/Cas9基因敲入构建KI小鼠

图2.利用CRISPR/Cas9同源重组构建基因敲入小鼠。向受精卵注射Cas核酸酶、sgRNA以及含有敲入片段的供体，筛选经过同源重组敲入成功的胚胎干细胞，植入代孕鼠体内发育成完整个体（Yang H,et al.Cell.2013）。

图3.通过同源重组在Nanog基因第4个外显子末端插入报告基因荧光蛋白Cherry（A）。Southern显示重组成功。Nanog基因只在胚胎干细胞表达，干细胞分化后nanog基因不再表达，表现为干细胞表达荧光蛋白Cherry，分化后的细胞无荧光（Yang H,et al.Cell.2013）。

二、我司提供病毒载体及细胞系构建服务

服务内容

1、sgRNA的设计；

2、细胞内sgRNA剪切活性筛选；

3、敲入载体的构建:Cas9-sgRNA表达质粒、donor质粒;

4、依据所要编辑的细胞选择Cas9、sgRNA和donor不同导入方式:

a、脂质体易转染细胞:使用质粒系统(Cas9、sgRNA和donor)；

b、脂质体难转染细胞:使用质粒系统电转化、慢病毒或腺相关病毒感染(Cas9、sgRNA和donor)；

5、筛选基因敲入单克隆细胞系。

服务流程

需客户提供内容/材料

1.目的基因序列（ID）以及物种来源；

2.靶细胞系及细胞培养条件（可选）；

3.病毒类型选择以及要求；

4.血清型选择。

表1.服务信息及最终交付内容、产品

CRISPR-Cas9基因敲入信息由武汉枢密脑科学技术有限公司为您提供，如您想了解更多关于CRISPR-Cas9基因敲入报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途