实验原理

       将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交，称为原位杂交。使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在细菌或其他真核细胞中的位置。

RNA原位核酸杂交又称RNA原位杂交组织化学或RNA原位杂交。该技术是指运用cRNA或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是：在细胞或组织结构保持不变的条件下，用标记的已知的RNA核苷酸片段，按核酸杂交中碱基配对原则，与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合（杂交），所形成的杂交体 (Hybrids）经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位杂交技术 经不断改进，其应用的领域已远超出DNA原位杂交技术。尤其在基因分析和诊断方面能作定性、定位和定量分析，已 成为最有效的分子病理学技术，同时在分析低丰度和罕见的mRNA表达方面已展示了分子生物学的一重要方向。

原位杂交实验步骤：前期胚胎的制备。

       原位杂交第一天进行重新水化和固定、预杂交、杂交。

       原位杂交第二天进行 1 将探针回收，放于－20C保存（通常探针可重复使用十次左右）2加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分钟，重复一次。3置换2XSSCT1ml，60℃，放置15分钟。4置换0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分钟，重复一次。5用MABT洗两次，每次五分钟，放在摇床轻轻摇动。6室温下加1ml 1：2：7溶液，时间为一小时。  7  按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶连地高辛抗体，4C 冰箱过夜。

       原位杂交第三天进行1） 用1ml含10%热灭活血清的MABT溶液置换抗体溶液，放置摇床上25分钟，然后用1mlMABT置换，25分钟，再用1mlMABT溶液置换，一小时以上，最后用1mlMABT溶液置换，25分钟。2） 用1ml 1mM**米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分钟。3）将胚胎转入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate（底物，用之前加5mM左旋米唑），十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗两三次后加上4%多聚甲醛固定，拍照。6）4C冰箱保存。

原位杂交服务内容

1. 细胞特异性mRNA转录的定位，可用于基因图谱，基因表达和基因组进化的研究；

2. 感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位，如EB病毒mRNA、人类**状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测；

3. 癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测；

4. 基因在染色体上的定位；

5. 检测染色体的变化，如染色体数量异常和染色体易位等；

6. 分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定，某些肿瘤的诊断和生物学剂量测定等。

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途