四唑盐（MTT）商品名为噻唑蓝

操作步骤

一、接种细胞

1、用胰蛋白酶消化汇合的单层细胞，将细胞收集到含血清的培养基中。
　　2、离心细胞悬液，使细胞沉积下来。用培养基重悬细胞，计数。
　　3、将细胞稀释至2.5×103-50×103 个/ml，每个微滴定板可容纳20ml细胞重悬液。
　　4、用加样器在平底96孔板中间十列的各孔中加入200μl细胞悬液，每孔加0.5×103-10×103 个细胞。
　　5、将200μl培养基加至第1列和第12列的8个孔中。第1列作读板议的空白对照。
　　6、将培养板放至塑料饭盒中，于37℃湿润环境中温育1-3天，等细胞进入指数生长期时可加入药物。

二、添加药物

1、用培养基将细胞毒性药物5倍系列稀释，共制备8个浓度。
　　2、对于贴壁生长的细胞，去除第2-11列各孔的培养基。
　　3、在第2列和第11列的8个孔中加入200μl新鲜配制的培养基，这些细胞作为对照。
　　4、在第3-10列的细胞中加入细胞毒性药物。每个药物浓度仅需4个孔，这样A-D行可用于第一种药物，E-H行用于第二种药物。
　　5、向每组4 孔中各加入200μl药物溶液。
　　6、将培养板放回塑料盒中，温育至确定时间。

三、生长期

1、在药物作用期结束时，去除所有含有细胞的孔中的培养基，加入200μl新鲜的培养基。
　　2、每日换液至2-3个PDTs[群体倍增时间]。

四、存活细胞数的估算

1、在生长期末，每孔中各加入200μl新鲜的培养基，在第1-11列所有孔中各加入50μl MTT。
　　2、用铝箔包裹培养板，于37℃湿润环境中温育4 h。
　　3、弃去孔中的培养基和MTT，在第1-11列所有孔中各加入200μl DMSO，以溶解残留的MTT-甲臜结晶。
　　4、在含有DMSO的各孔中加入甘氨酸缓冲液（每孔25μl）。
　　5、立即在570nm处记录吸光值。读板仪用第1 列中含培养基和MTT但不含细胞的各孔调零。

五、分析

以药物浓度为横坐标（X轴），吸光值为纵坐标（Y轴）绘制曲线图。第2列和第11列各孔中得出的平均吸光值作为对照吸光值，对照组吸光值减少一半时所需的药物浓度为IC50 浓度。
广州华腾生物医药科技有限公司提供以动物体内实验、药理药效非临床评价为核心的技术服务。公司的核心团队成员由药理毒理学、实验动物学、生物材料专业人员组成，可提供全方位的体内和体外非临床评价，以支持项目的 IND 注册。我们公司坚持以客户为中心，按照 CFDA 和 FDA 非临床研究技术指导原则制定综合解决方案来加速研发进程，节约研发成本。