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crispr/cas9 knock out POOL

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CRISPR/Cas9 基因敲除基本实验流程

1. 确定待敲除基因的靶位点
2. 设计识别靶位点的识别的一对DNA Oligo（引物）
3. 构建可表达sgRNA的Cas9质粒
4. 含sgRNA 表达元件的Cas9质粒的活性检测
5. 利用Cas9质粒建立knock-out细胞系

技术优势

无基因序列、细胞、物种限制；
实验设计简单准确、实验周期短、成本低；
成功率几乎可达100%；毒性低，使用带点突变的Cas9(D10A)可避免脱靶效应（Cell. 2013 Sep 12;154(6):1380-9）。
活性明显高于人工构建的ZFN和TALEN核酸酶活性。
克服了常规的ZFN和TALEN方法中制备有活性的人工合成核酸酶较繁琐的确点，更有专业网站辅助设计可特异识别目标基因的gRNA，设计过程非常简单易行。
CRISPR/Cas9技术是在DNA水平上进行基因敲除，将暂时性的基因敲降（Knock down）如RNA干扰（RNAi）和MO敲降等转变成永久性的基因敲除（Knock Out）转变，建立的稳定可传代的基因敲除的细胞系或突变体系可极大地方便研究者的深入研究。
融Cas9、sgRNA和报告基因于一个质粒，一个质粒搞定一个基因的修饰。更有报告基因，方便使用荧光显微镜或药物筛选，加速获得基因突变的细胞系。

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交付结果

实验周期

~30个工作日

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