流式细胞仪检测

服务介绍

        流式细胞仪（flow cytometer）是一种能够探测和计数以单细胞液体流形式穿过激光束的细胞检测装置，由于在检测中使用的细胞标志示踪物质为荧光标记物，因此，用来分离、鉴定细胞的流式细胞仪有被称为荧光激活细胞分类仪，是分离和鉴定细胞群及亚群的一种强而有力的应用工具。

         流式细胞分析/分选系统主要应用于：1.干细胞组织工程在研究；2.细胞增值、活性和凋亡研究；3.疾病细胞如炎症细胞、肿瘤细胞等的发生、发展和转归研究；4.基因表达和表达调控研究；5.细胞内信号传导和生物大分子间相互作用研究；6.各种病原体如病毒、细菌等基础和致病性和致病机理研究；7.药理药效和药物开发研究；8.移植和细胞治疗研究；9.生物材料对细胞结构、活性和功能的影响等。

一. 组织培养细胞的细胞准备

       1．对于悬浮培养的细胞，把细胞分装到一个尖底离心管中，对细胞进行计数和活性分析，然后进入步骤3；

       2．对于贴壁培养的细胞，建议用AccutaseTM Enzyme Cell 完全培养基从培养皿上吹起并吹散细胞凝聚物，然后把细胞分装到一个尖底离心管中，对细胞进行计数和活性分析，进入步骤3；

       3．离心细胞然后用流式细胞仪染色液重悬细胞使其终浓度为2×107个细胞/ml。

二. 淋巴组织的细胞准备

       1．采集组织（采集组织（脾，淋巴结，胸腺）放进一个细胞培养皿中，用3 ml注射器的活塞挤压以制成单细胞悬液，此过程用10ml的染色缓冲液；

       2．加入10ml染色液收集细胞，使细胞悬液通过尼龙滤网以除去成团的细胞和细胞碎片，收集细胞悬液于尖底离心管中；

      3．4℃离心细胞悬液4-5分钟（300-400g），弃掉上清液；

       4．重悬细胞沉淀，细胞计数和活性分析；

       5．按照步骤3离心细胞然后用合适体积的染色液重悬细胞，使细胞终浓度为2×107个细胞/ml。

三. 非淋巴组织的细胞制备

       1．采集组织，用剪刀或手术刀切成2-4mm的小块；

       2．按照酶的使用说明书，加入适量用PBS稀释的酶，孵育。

       3．用移液管轻轻吹散细胞，并用滤网过滤除去成团的细胞和细胞碎片；

       4．4℃离心细胞悬液4-5分钟（300-400g），弃掉上清液；

       5．用PBS重悬细胞沉淀以移除剩余的酶溶液；

       6．重复步骤4；

       7．重复步骤5和6；

       8．用流式染色液重悬细胞沉淀，细胞计数和活性分析；

       9．按照步骤4离心细胞然后用合适体积的染色液重悬细胞，使细胞终浓度为2×107个细胞/ml。

四. 鼠脾细胞中红细胞的裂解

       1．采集小鼠的脾脏并且制成单细胞悬液；

       2．4℃ 离心沉淀细胞（300-400g），弃掉上清液；

       3．用5ml脾的红细胞裂解液重悬细胞；

       4．室温震荡孵育4-5分钟（也可在冰上进行）；

       5．加入20-30ml PBS 停止反应；

       6．4℃ 离心沉淀细胞（300-400g），然后用合适体积的缓冲液重悬细胞沉淀，继续下一步试验；

       7．细胞计数。

客户提供 

      1. 组织、血液样本或细胞样本。

        2.  分选所采用的荧光、荧光抗体（或由公司代购）

        3.  运输说明：外地血清，血浆样本，用冰袋运输，样本用泡沫隔开，不要直接与冰袋接触，防止凝血。

最后交付

      1.  分离后的细胞。

        2.  实验报告：详细操作步骤、分选图片

参考文献

      1.  Fukusumi T, et al. CD10 as a novel marker of therapeutic resistance and cancer stem cells in head and neck squamous cell carcinoma. Br J Cancer. 2014 Jul 29;111(3):506-14.