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CRISPR-Cas9敲除细胞系
| 参考报价： | 面议 | 型号： | CRISPR-Cas9敲除细胞系 |
| 品牌： | 研载生物 | 产地： | 全国 |
| 关注度： | 暂无 | 信息完整度： |  |
| 样本： | 暂无样本 | 典型用户： | 暂无 |
CRISPR/Cas9敲除细胞系
一、技术简介
CRISPR/Cas9是最 新出现的一种由RNA指导的Cas9核酸酶对靶向基因进行编辑的技术，也是目前研究最热的基因编辑技术。由于其具有构建方法简单快捷、基因修饰效率高、成本低廉、实验周期短、适用范围广等诸多优点，目前已成功应用于人类细胞、斑马鱼、大/小鼠等多种动植物的基因组精确修饰。
二、实验流程
1. 预实验
1.1 Cas9导入细胞方法：尝试各种方法，如脂质体类转染、电转、慢病毒感染、腺病毒感染等，确定高效导入Cas9方法。
1.2 药物浓度预实验：降低后续阳性克隆筛选和检测工作难度。
1.3 单克隆培养情况：确认细胞是否可以单克隆培养。
2. 基因敲除（敲入）
2.1 靶点设计：一般在不同转录产物的共同外显子上设计3个靶点，靶点位置尽量在基因CDS的前1/3，ATG之后，最好能破坏重要的domain和所有的转录产物isoform。第一批合成构建3个，效果不佳或时间紧张的可一次构建6个。
2.2 载体构建和病毒包装：根据预实验结果，选择合适的普通载体或病毒载体（普通Cas9载体、慢病毒Cas9载体和腺病毒Cas9载体）。
2.3 内源活性筛选：转染细胞或感染细胞48h后，使用Puro或Blasticidin筛选48h，提取基因组DNA。使用T7E1酶验证打靶载体的活性，将有效的突变型PCR产物测序验证。
2.4 Donor载体（基因敲入）：根据筛选的gRNA靶点位置，构建Donor普通载体或腺病毒载体，共转染/感染Cas9-gRNA和Donor。
2.5 单克隆筛选：无限稀释到每孔1个细胞的数量，每株细胞铺至少2个96孔板。细胞数量足够后，验证内源活性并送测。
2.6 获得突变型：如需纯合子，则可能需要重复步骤3-5。
三、服务说明及结果
1. 客户提供：物种、基因名称、靶细胞。
2. 公司提供：验证成功的基因敲除细胞、基本实验步骤和测序验证结果等详细实验报告。
3. 实验周期：30-50个工作日。
一、技术简介
CRISPR/Cas9是最 新出现的一种由RNA指导的Cas9核酸酶对靶向基因进行编辑的技术，也是目前研究最热的基因编辑技术。由于其具有构建方法简单快捷、基因修饰效率高、成本低廉、实验周期短、适用范围广等诸多优点，目前已成功应用于人类细胞、斑马鱼、大/小鼠等多种动植物的基因组精确修饰。
二、实验流程
1. 预实验
1.1 Cas9导入细胞方法：尝试各种方法，如脂质体类转染、电转、慢病毒感染、腺病毒感染等，确定高效导入Cas9方法。
1.2 药物浓度预实验：降低后续阳性克隆筛选和检测工作难度。
1.3 单克隆培养情况：确认细胞是否可以单克隆培养。
2. 基因敲除（敲入）
2.1 靶点设计：一般在不同转录产物的共同外显子上设计3个靶点，靶点位置尽量在基因CDS的前1/3，ATG之后，最好能破坏重要的domain和所有的转录产物isoform。第一批合成构建3个，效果不佳或时间紧张的可一次构建6个。
2.2 载体构建和病毒包装：根据预实验结果，选择合适的普通载体或病毒载体（普通Cas9载体、慢病毒Cas9载体和腺病毒Cas9载体）。
2.3 内源活性筛选：转染细胞或感染细胞48h后，使用Puro或Blasticidin筛选48h，提取基因组DNA。使用T7E1酶验证打靶载体的活性，将有效的突变型PCR产物测序验证。
2.4 Donor载体（基因敲入）：根据筛选的gRNA靶点位置，构建Donor普通载体或腺病毒载体，共转染/感染Cas9-gRNA和Donor。
2.5 单克隆筛选：无限稀释到每孔1个细胞的数量，每株细胞铺至少2个96孔板。细胞数量足够后，验证内源活性并送测。
2.6 获得突变型：如需纯合子，则可能需要重复步骤3-5。
三、服务说明及结果
1. 客户提供：物种、基因名称、靶细胞。
2. 公司提供：验证成功的基因敲除细胞、基本实验步骤和测序验证结果等详细实验报告。
3. 实验周期：30-50个工作日。
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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途
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