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RNA干扰

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参考报价: 面议 型号: RNA干扰
品牌: 怀信生物 产地: 江苏无锡
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                           一、RNA干扰服务介绍
       RNA干扰(RNA interfering,RNAi)现象是由与靶基因序列同源的双链RNA引发的广泛存在于生物体内的序列特异性基因转录后的沉默过程。由于RNAi具有高度的序列专一性和有效的干扰,可以特异地将基因沉默,从而使基因功能丧失或基因表达量的降低,因此可以作为功能基因组学的一种强有力的研究工具。RNAi技术可广泛应用到包括功能学,药物靶点筛选,细胞信号传导通路分析,疾病治疗等领域。我们应用专利算法和Invitrogen的BLOCK-iT™ RNAi Designer平台,可对靶基因序列进行干扰位置效应评价和序列同源性分析,完成siRNA/shRNA/miRNA等多种序列的设计,并提供从siRNA合成、RNAi载体构建到RNAi相关的病毒包装、RNAi功能验证等全面的RNAi解决方案。

二、RNA干扰服务内容
一)siRNA合成

    对于瞬时基因沉默试验,化学合成siRNA的方法操作简便,容易获得高水平的瞬时沉默效果,特异性强。我们通过严格设计来增强siRNA的专一性;针对某靶基因设计的3条siRNA可保证其中两条的Knockdown效率达到70%(在转染效率大于80%的情况下)。

二)RNAi载体构建
     RNAi载体表达可以长时间稳定地研究基因功能,载体在细胞中持续抑制靶基因的表达可达数星期甚至更久。
miR RNAi载体构建-利用细胞内源性的miRNA加工机制,相比传统shRNA载体可更高效地表达RNA发夹结构,并具有采用EmGFP进行表达追踪和顺式表达多个miRNA的优点。Invitrogen针对人类、大鼠、小鼠的大多数基因预先设计好了BLOCK-iT miR RNAi Select序列,每个基因设计的4条BLOCK-iT miR RNAi Select序列我们保证至少有2条可以达到至少70%转录水平的knockdown(在转染效率>80%的前提下)。
 shRNA载体构建—设计针对特定基因的shRNA序列,并将其连入组成型pENTR™/U6或诱导型pENTR™/H1/TO载体中。
三) RNAi导入优化
     由于siRNAs是进入细胞后才能对蛋白的表达进行抑制,因此如何高效地将siRNAs转入细胞也是成功抑制基因表达的关键步骤。例如,一个siRNA分子对某特定基因的抑制效率为90%,而转染效率为10%,那么最后抑制蛋白表达最后的效率只有9%,可见如何提高siRNAs的导入效率非常重要。
RNAi转染优化-为了使得RNAi实验获得最大化的干扰效果,利用Invitrogen专利的脂质体转染试剂技术,针对多种真核生物细胞进行转染参数的优化。RNAi 荧光标记的阴性对照、阳性对照可以用于进行转染效率的优化。
病毒侵染优化-针对难于转染细胞(特别是神经细胞、悬浮细胞、干细胞)和In vivo实验,基于Invitrogen的RNAi病毒载体构建、包装、浓缩等技术,利用腺病毒或慢病毒进行RNAi研究
筛选RNAi稳定细胞株-利用抗生素来筛选稳定表达shRNA或miRNA的细胞株
四)RNAi干扰效果检测
     用实时定量PCR方法检测mRNA水平的基因敲减效果;通过Western blot方法检测蛋白水平的基因敲减效果


三、RNA干扰服务说明
1、客户提供:提供RNA名称序列;  
2、实验周期:2-3周;
3、若另有疑问欢迎向本公司咨询,我们将竭诚为您服务。 
 

四、质量承诺
1、真实的原始实验数据;
2、权威的实验报告;
3、详细的实验步骤。


RNA干扰信息由无锡怀信生物医药科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于RNA干扰报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。

注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途

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