一、成脂细胞诱导介绍
成脂诱导分化操作规程:
所需材料:
1、 PBS,0.25% Trypsin-EDTA
2、原代MSCs
3、怀信生物成脂诱导分化培养基
操作方法与步骤
为了得到优异的诱导结果,请执行下述操作步骤:
1、分离原代MSCs后,置于37℃,5%CO2培养箱中培养,每2-3天换液或传代。
2、 建议使用低代次的MSCs(<8代,MSCs随着传代后代次的增加,多向潜能也逐渐降低)。细胞均匀分布,融合度达到80%时(见图A),用0.25%Trypsin-EDTA消化传代。
3、收集细胞,按照5X104 cells/cm2的细胞密度接种在孔板中,37℃,5%CO2培养。
4、待细胞融合度接近或者达到100%(见图B),开始诱导,小心弃去培养基,加入成脂诱导培养基A。成脂诱导培养基要预先37℃预热并沿壁加入。(需将原瓶培养基分装至50ml离心管后,对分装后即将使用的培养基进行预热)
5、诱导48h吸走A液,加入37℃预热的成脂诱导分化培养基B液。
6、再诱导24h后,吸走B液,换回A液诱导。
7、A液和B液交替作用3-5次后(12-20天),继续用B液维持培养直至细胞内的油滴足够大。
注意:
1、MSCs纯度不够
2、长时间在培养箱外观察
3、培养基无预热
4、晃动培养板
5、培养箱频繁开关
6、培养板无包被
7、换液未按照上述规程操作
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注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途