siRNA/shRNA载体构建

       RNA干扰（RNAi）是有效沉默或抑制目标基因表达的过程，该过程通过双链RNA（dsRNA）使得目标基因相应的mRNA选择性失活来实现的。RNA干扰由转运到细胞细胞质中的双链RNA激活。沉默机制可导致由小干扰RNA（siRNA）或短发夹RNA（shRNA）诱导实现靶mRNA的降解，或者通过小RNA（miRNA）诱导特定mRNA翻译的抑制。

       siRNA作用原理：在RNAi效应阶段，siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成所谓RNA诱导沉默复合物（RNA-induced silencing complex, RISC）。激活的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA转录本上，并在距离siRNA3’端12个碱基的位置切割mRNA。siRNA制备的方法一般有:化学合成siRNA，哺乳动物细胞载体shRNA克隆和慢病毒载体shRNA克隆。

       shRNA干扰载体构建：短发卡RNA (shRNA)是可以克隆到表达载体并表达短的干扰RNA (siRNA, 19-21个核苷酸的RNA双链)的DNA分子。可根据靶标设计短发卡RNA(shRNA)序列并将其克隆到特定载体上。

                                                  

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