噬菌体展示文库构建

噬菌体展示技术服务平台

 

       M13单链丝状噬菌体展示系统是目前应用较广泛的文库展示系统，通过将蛋白、抗体或多肽与噬菌体pIII蛋白融合表达，使之参与噬菌体组装，并展示在噬菌体表面，形成噬菌体展示文库。使用噬菌体展示文库，针对特定靶分子进行3-5轮亲和筛选，可以富集能特异性结合靶分子的噬菌体，得到相应的 DNA序列信息。

 

       艾柏森生物目前开发的噬菌体展示技术服务平台涵盖了免疫抗体库、天然抗体库等常用的文库类型，可根据客户的特殊需求定制个性化文库，并提供灵活高效的筛选服务。

 

噬菌体展示服务简介

 

       M13单链丝状噬菌体展示系统是目前应用最广泛的文库展示系统，通过将蛋白、抗体或多肽与噬菌体pIII蛋白融合表达，使之参与噬菌体组装，并展示在噬菌体表面，形成噬菌体展示文库。使用噬菌体展示文库，针对特定靶分子进行3-5轮亲和筛选，可以富集能特异性结合靶分子的噬菌体，得到相应的 DNA序列信息。

 

       艾柏森生物目前开发的噬菌体展示技术服务平台涵盖了免疫抗体库、天然抗体库等常用的文库类型，可根据客户的特殊需求定制个性化文库，并提供灵活高效的筛选服务。

 

艾柏森生物平台系统主要包括pComb3噬菌体展示系统和pCANTAB5e噬菌体展示系统。
 

pComb3噬菌体展示技术流程

抗体基因库的获得：收集目标抗体宿主的免疫细胞，提取细胞总RNA；反转录后，使用多对引物分别扩增VH-CH1抗体基因片段和VL-CL1抗体基因片段；

抗体基因库转化大肠杆菌：将以上扩增的抗体基因库连接至pComb3质粒，随后电转化大肠杆菌XL12 Blue；同时鉴定基因库库容（及抗体基因的插入率）；

噬菌体Fab抗体库的构建：将辅助噬菌体VCSM13加入到转入了抗体基因的，生长至对数生长期的大肠杆菌中进行噬菌粒拯救；培养过夜后，离心收集上清即获得噬菌体Fab抗体库；

抗体库的滴度测定：取少量上述获得的噬菌体Fab抗体库，梯度稀释后进行噬斑培养实验，观察噬斑生长情况以判断噬菌体Fab抗体库的滴度；

噬菌体抗体库的富集筛选：使用靶标抗原包被酶联板，加入噬菌体抗体进行孵育，随后进行洗板、洗脱；将洗脱下来的噬菌体抗体进行中和后，再次感染细菌，并进行第二轮的淘洗；共进行3轮淘洗，每一轮洗脱后都进行滴度测定；最后一轮筛选时，设BSA包被的对照组以确定是否富集了大量抗BSA的噬菌体抗体。

 

噬菌粒载体pComb3遗传图谱

 

 

辅助噬菌体VCSM13遗传图谱

 

pCANTAB5e噬菌体展示技术流程

ScFv基因库的获得：收集目标抗体宿主的免疫细胞，提取细胞总RNA；反转录后，使用多对引物分别扩增抗体基因VH和VL，纯化回收VH和VL片段后，使用Linker引物将VH和VL基因随机拼接成ScFv基因库；

ScFv基因库转化大肠杆菌：将ScFv基因片段连接至pCANTAB5e载体，随后电转化大肠杆菌TG1；同时鉴定ScFv基因库库容（及基因的插入率）；

噬菌体ScFv抗体库的构建：将辅助噬菌体M13K07加入到转入了ScFv抗体基因的，生长至对数生长期的大肠杆菌中进行噬菌粒拯救；培养过夜后，离心收集上清即获得噬菌体ScFv抗体库；

抗体库的滴度测定：取少量上述获得的噬菌体ScFv抗体库，梯度稀释后进行噬斑培养实验，观察噬斑生长情况以判断噬菌体ScFv抗体库的滴度；

噬菌体抗体库的富集筛选：使用靶标抗原包被酶联板，加入噬菌体抗体进行孵育，随后进行洗板、洗脱；将洗脱下来的噬菌体抗体进行中和后，再次感染细菌，并进行第二轮的淘洗；共进行3轮淘洗，每一轮洗脱后都进行滴度测定；最后一轮筛选时，设BSA包被的对照组以确定是否富集了大量抗BSA的噬菌体抗体。

 

 

噬菌粒载体pCANTAB5e遗传图谱

 

 

辅助噬菌体M13K07遗传图谱

 

噬菌体展示技术服务项目

 

噬菌体展示文库构建信息由安诺伦（北京）生物科技有限公司为您提供，如您想了解更多关于噬菌体展示文库构建报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途