基因组编辑技术（genome editing）是一种可以在基因组水平上对DNA序列进行改造的遗传操作技术。这种技术的原理是构建一个人工内切酶，在预定的基因组位置切断DNA，切断的DNA在被细胞内的DNA修复系统修复过程中会产生突变，从而达到定点改造基因组的目的。DNA修复系统主要通过两种途径修复DNA双链断裂（double-strand break,DSB）,即非同源末端连接（Nonhomologous end joining, NHEJ）和同源重组（homologous recombination, HR）。
基因编辑细胞株包括基因敲除细胞株、基因敲入细胞株、点突变细胞株和过表达细胞株等。

基因敲除细胞株

CRISPR-Cas9这种靶向特异的DNA内切酶切割目的DNA产生双链DNA断裂(DSB)，断裂的DNA招募细胞内DNA修复机器进行修复。在没有外源同源DNA序列时，细胞主要通过NHEJ途径将断裂的DSB位点连接起来。NHEJ介导的连接保真性不高，容易产生插入或者缺失(indel)，往往导致蛋白质编码基因的移码突变，进而产生基因敲除。

常见基因敲除细胞株类型

分类标准	类别
基因敲除策略	移码突变、片段敲除、多基因敲除等
细胞类型	肿瘤细胞、细胞株、IPS等

基因激活细胞株构建

将切割活性缺失的Cas9蛋白（dCas9）与转录因子（TF，如VPR等）融合，利用dCas9可在sgRNA指导下结合于基因的启动子区域，融合的转录因子招募其他转录机制，从而提高此基因的转录水平，实现基因的功能增强（gain of function）。


点突变和基因敲入细胞株

利用CRISPR/Cas9系统将基因组的特定位点切开，同时提供供体序列（Donor Sequence）作为模板，利用同源重组修复，达到点突变或基因敲入的目的。







服务流程
我们可以提供基因敲除，基因敲入，基因过表达，点突变等细胞株的构建

 

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