原核蛋白表达系统以大肠杆菌为宿主细胞，由于细胞增殖快、表达量高、纯化方便、稳定性好、抗污染能力强和成本低等优势，原核蛋白表达系统zei为成熟可靠，同时也是目前蛋白表达实验中zei常用、zei经济实惠的表达系统。
根据客户需求，提供从基因克隆，载体构建，到蛋白表达及纯化一站式蛋白表达服务。
服务特色：
1、一站式解决方案，从基因合成，载体构建，蛋白表达及纯化一站式服务。
2、专业的技术团队，具有多年的蛋白表达及纯化服务经验，经验丰富。
3、完备表达载体库，多种促溶促表达标签的优化组合，确保成功高效表达。
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服务步骤
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实验内容
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交付结果
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步骤1：
目的基因全基因合成
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1.从GenBank中寻找目的蛋白的cDNA序列。
2.根据选用的表达系统对cDNA进行密码子及mRNA二级结构的优化。
3.合成设计好的基因序列，并克隆到标准T载体。
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1.含目的基因的冻干质粒，穿刺菌及测序报告（如果客户直接提供构建好的质粒，则免去这部分费用）。
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步骤2：
目的基因亚克隆
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1.培养并抽提含有目的基因的载体质粒。
2.将目的基因亚克隆到合适的表达质粒上。
3.测序验证表达质粒的准确性。
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正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。
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步骤3：
E. coli
表达菌株转化及筛选
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1.培养并抽提构建好的表达质粒。
2.将表达质粒转化至高效的E. coli表达菌株中。
3.至少挑选3个阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。
4.SDS-PAGE电泳检测培养后的目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
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重组质粒的表达菌株及表达检测报告。
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步骤4：
目的蛋白表达及纯化
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1.摇瓶培养1L重组细菌，对蛋白表达时间，温度以及IPTG浓度等表达条件进行优化，并诱导表达目的蛋白。
2.通过亲和层析，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
3.利用蛋白酶去除不需要的纯化标签，再纯化获得所需的目的蛋白。
4.通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制zei终产品质量。
5.通过Western-blot验证目的蛋白正确性。
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1.纯化好的目标蛋白1-5mg及纯化报告。
2.可按客户要求提供含纯化标签或去除纯化标签的目的蛋白，纯度zei高可达95%以上。
3.提供QC报告：SDS-PAGE，Western
Blot。
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步骤5：
目的蛋白的再加工及详细检测
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1.对生物学活性要求较高的纯化后蛋白产品进行复性研究。
2.内毒素去除，除菌，冻干等进一步加工。
3.通过HPLC，质谱等方法详细检测目的蛋白的质量
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加工后的终产品及相关实验和检测报告。
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备注：
1.根据客户需要，客户提供基因序列，我们提供基因合成，载体构建，蛋白表达及纯化一站式服务，zei终按步骤收取实验费用。
2.蛋白在表达之前需要对核酸序列进行前期分析，但细胞膜蛋白和一些特殊的毒性蛋白不在服务范围之内。
3.因为每个重组蛋白的表达量及纯化得率都不相同，我们zei终根据实际情况将给客户提供zei少1mg，zei多10mg的目标蛋白，所收取的费用是相同的，需要再次纯化获得更多的蛋白，另收费为2000/mg。
4.每次Western blot检测zei多7个样品，因为要加入阳性对照，阴性对照以及Marker。本步骤只包含一次免费检测，如果需要更多次检测则费用为1500元/次。我们可以免费为客户提供抗His-tag的一抗，如果客户需要使用其他一抗，则需要客户提供，或者我们公司代购，费用单独计算。
5.我们还可以承接酵母蛋白表达，哺乳动物蛋白表达和昆虫细胞蛋白表达等服务。
原核蛋白表达与纯化服务价格
原核蛋白表达与纯化服务信息由北京君诺德生物技术有限公司为您提供，如您想了解更多关于原核蛋白表达与纯化服务报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。
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