在正常细胞中，***脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡zei早期，膜***脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧，这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。Annexin V是一种***脂结合蛋白，与***脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的***脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。***化丙***（Propidium Iodide, PI）或7-AAD是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI或7-AAD能够透过细胞膜而使细胞核染色。因此将Annexin V与PI或7-AAD匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

服务内容：

1. 细胞培养。     
2. 流式凋亡检测。

1. 用去离子水将10×Binding Buffer稀释成1×Binding Buffer；
2. 细胞收集。悬浮细胞收集：离心5分钟；贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化收集后（注：胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞膜上***脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合），于室温2000rpm离心5～10分钟，收集细胞；
3. 细胞洗涤：用预冷1×PBS（4℃）重悬细胞一次，2000rpm离心5～10分钟，洗涤细胞；
4. 加入300μL 的1×Binding Buffer 悬浮细胞；
5. Annexin V-FITC标记：加入5μL的Annexin V-FITC混匀后，避光，室温孵育15分钟；
6. PI标记：上机前5分钟再加入5μL的PI染色。
7. 上机前，补加200μL的1×Binding Buffer。

1. 检测细胞株（若实验室有，可免费提供）。
2. 待测毒性药物（根据实验方案有无）。
3. 实验设计方案或参考文献。

AnnexinV/PI双染流式凋亡技术服务价格

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